Polimorfismes gènics del receptor β-adrenèrgic i resposta hemodinàmica a la dobutamina durant l’ecocardiografia d’estrès de dobutamina | la revista farmacogenòmica

Polimorfismes gènics del receptor β-adrenèrgic i resposta hemodinàmica a la dobutamina durant l’ecocardiografia d’estrès de dobutamina | la revista farmacogenòmica

Anonim

Resum

El nostre objectiu era determinar si els receptors β 1 -adrenèrgics (β 1 -AR) i els polimorfismes del gen β 2 -AR influeixen en la freqüència cardíaca (HR), la pressió arterial sistòlica (SBP) i la resposta arterial diastòlica (DBP) a la dobutamina durant l'estrès de dobutamina ecocardiografia (DSE). Es van inscriure pacients ( n = 163) amb DSE clínicament indicada. Les dosis de Dobutamina es van classificar de 5 a 40 μg kg –1 min –1 a intervals de 3 minuts i es van mesurar HR, SBP i DBP. Es van determinar genotips per a polietrofismes β 1 -AR Ser49Gly, β 1 -AR Arg389Gly, β 2 -AR Arg16Gly i β 2 -AR Gln27Glu mitjançant anàlisis de polimorfisme en cadena de reacció-restricció de longitud de fragment de polimerasa, pirosecució i mètodes d'extensió d'un primer primer. Els homozigots β 2- AR Glu27 van tenir una resposta de HR més gran a la dosi de dobutamina més alta que els portadors de Gln27 ( P = 0, 002). Els homozigots β 2- AR Gly16 van tenir una menor resposta de HR durant 5-30 μg kg −1 min -1 del protocol d'infusió de dobutamina en comparació amb els portadors Arg16 ( P = 0, 03). Es van trobar diferències en el genotip de SBP per β 2 -AR codon 16 i en genotip de DBP per β 1 -AR 389 a la línia de base i es van mantenir al llarg de DSE ( P = 0.06 i 0.02, respectivament). Tanmateix, la magnitud de la resposta SBP i DBP a la dobutamina no va diferir significativament pels genotips β 2 -AR 16 o codis β 1 -AR 389, respectivament. Aquestes dades suggereixen que els quatre polimorfismes β 1 - i β 2 -AR seleccionats no influeixen substancialment en la magnitud de la resposta hemodinàmica a la dobutamina durant la DSE.

Introducció

Hi ha polimorfismes comuns en els gens que codifiquen els receptors β 1 - i β 2 -adrenèrgics (β 1 - i β 2 -AR). Aquests inclouen una serina a la glicina al β 1 -AR codó 49 (Ser49Gly), una arginina a la glicina al β 1 -AR codó 389 (Arg389Gly), una arginina a la glicina al β 2 -AR codó 16 (Arg16Gly) i una glutamina a àcid glutàmic al β 2 -AR codó 27 (Gln27Glu). Estudis in vitro han proporcionat evidències sobre la seva base funcional, 1, 2, 3 i aquests polimorfismes han estat implicats en resposta diferencial a antagonistes i agonistes de β 1 i β 2- AR en nombrosos estudis. Concretament, els estudis han demostrat que el genotip β 1 -AR és un predictor significatiu de les respostes de la pressió arterial i la fracció d’expulsió als bloquejadors β, 4, 5, 6, 7, 8 i les respostes als agonistes de β 2 s’han associat amb β 2- AR. polimorfismes. 9, 10

La Dobutamina és un potent inotrop intravenós sintètic que és principalment un agonista en β 1 -AR amb efectes estimulants suaus en β 2 -AR i α 1 -AR. Un estudi recent realitzat en voluntaris sans tractats amb atropina va demostrar que el genotip del β 1 -AR codon 389 estava associat a una resposta de contraputamina i sistòlica més contràctil i sistòlica (SBP) més gran a la dobutamina. Aquest interessant estudi va proporcionar una visió del paper potencial dels polimorfismos β-AR en resposta a un agonista β d’ús habitual. Tanmateix, atès que aquest estudi es va realitzar davant del bloqueig del sistema nerviós parasimpàtic, es desconeix la relació entre resposta i genotip en presència d'un sistema nerviós parasimpàtic intacte, com seria la norma en el marc clínic. Addicionalment, l’estudi no va examinar els efectes dels polimorfismes β2-AR sobre la resposta a la dobutamina.

A causa dels efectes inotròpics i cronotròpics positius de la dobutamina, l’ecocardiografia d’estrès de la dobutamina (DSE) s’ha convertit en un mètode popular per a la detecció de malalties de l’artèria coronària en pacients incapaços de sotmetre’s a proves d’estrès estàndard. 12, 13 Alguns pacients experimenten una resposta ràpida de freqüència cardíaca (HR) després de l'administració de dobutamina, mentre que d'altres requereixen dosis màximes d'infusió de dobutamina o addició d'atropina per assolir la RH objectiu. A més, alguns pacients presenten una hipertensió arterial o hipotensió durant el protocol de DSE que limita la capacitat de completar la prova i assolir la RH objectiu. 15, 16, 17 Tenint en compte les dades anteriors, es va plantejar la hipòtesi que els polimorfismes β 1 i β 2 -AR estarien associats a respostes de RH, SBP i pressió arterial diastòlica (DBP) a dobutamina en el marc clínic i podrien ajudar a explicar algunes de la variabilitat interpatient habitual observada en les respostes hemodinàmiques a la dobutamina durant les proves de DSE. Així, es va provar de forma prospectiva aquesta hipòtesi en pacients sotmesos a DSE clínicament indicada, però abans de l’administració d’atropina.

Resultats

Estudiar població

L’estudi ha estat format per 163 pacients (79 homes, 84 dones; 132 caucàsics dels quals 7 indicaven ètnia hispànica; 26 negres; 3 asiàtics; 1 pacífic insular i 1 pacient que classificava la seva raça com a altra). Les freqüències d’al·lels i les distribucions de genotips es mostren a la taula 1. Els genotips del receptor β 1 i β 2 estaven en equilibri de Hardy-Weinburg. La taula demogràfica de base es mostra a la taula 2. L'edat mitjana de la població estudiada va ser de 56 ± 11 anys (rang 32-83 anys). L’estat de malaltia concomitant més freqüent a la població va ser la hipertensió ( n = 106; 65%). El nombre de pacients amb antecedents d’hipertensió no diferia significativament entre cap dels grups del genotip β-AR. L’índex de massa corporal diferia significativament entre els grups del genotip de β 2 -AR 27 Gln / Gln i Gln / Glu ( P = 0.005). En general, el 44% dels pacients en aquest estudi van requerir atropina després de la dosi de 40 μg kg −1 min −1 de dobutamina per assolir la RH objectiu. No hi va haver diferències significatives entre els grups del genotip β 1 o β 2 -AR en pacients que van requerir vs no van requerir administració de atropina (dades no mostrades).

Taula completa

Taula completa

Hemodinàmica en repòs

El descans en HR, SBP i DBP es van comparar mitjançant genotip (taula 3; cohort d'estudi complet). El descans de SBP i DBP variava significativament pel genotip de β 1 -AR 389 i genotip de β 2 -AR de codó 16. La taxa d’ús de medicaments antihipertensius no diferia entre els grups de genotips β 1 -AR codon 389 o els codis β 2 -AR 16. El descans de SBP i DBP van ser significativament més alts en homozigots β-AR Arg389 en comparació amb els portadors de Gly389 a tota la cohort d’estudi ( P = 0.012 i 0.025, respectivament; Taula 3). De la mateixa manera, el SBP i el DBP en repòs van ser significativament més elevats en els portadors β -AR Gly16 en comparació amb els homozigots Arg16 ( P = 0.027 i 0.019, respectivament; Taula 3). Quan els pacients caucàsics van ser analitzats sols, SBP i DBP en repòs van ser significativament més alts en homozigots β-AR Arg389 en comparació amb els portadors de Gly389 (sistòlica 152 ± 24 vs 135 ± 28 mm Hg, P = 0, 001; diastòlic 81 ± 12 vs 75 ± 14 mm Hg, P = 0, 01). En els caucàsics, el SBP en repòs va ser significativament més gran en homozigots β 2 -Gly16 en comparació amb homozigots Arg16 (148 ± 26 vs 132 ± 25; P = 0, 027) i homozigots Gly16 en comparació amb heterozigots (147 ± 27 vs 132 ± 25; P = 0, 028). El repòs de DBP també va ser més gran en homozigots β 2- AR Gly16 en comparació amb homozigots Arg16 (80 ± 13 vs 73 ± 14; P = 0, 07) i superior en heterozigots en comparació amb homozigots Arg16 (80 ± 14 vs 73 ± 14; P = 0, 04 ). Els genotips β 1 -AR codon 49 i β 2 -AR codon 27 no van influenciar significativament en la resta de la cohort d'estudi ni en el grup caucàsic ni en els analitzats només en el grup caucàsic. De la mateixa manera, la RH en repòs no va diferir significativament entre cap grup genotip β 1 - o β 2 -AR a tota la cohort d'estudi, ni quan es va analitzar en el grup caucàsic només. Les dades hemodinàmiques en repòs també es van analitzar segons l’haplotip β 1 - i β 2- AR. L'anàlisi de l'aflotip no era més informativa que l'anàlisi SNP única i, en general, les associacions eren més febles (dades que no es mostren).

Taula completa

Resposta de freqüència cardíaca durant DSE

Hi va haver una diferència significativa en el patró de resposta de RH a la dobutamina en el temps entre els genotips de β 2 -AR codon 27 ( P = 0, 002, tots els pacients, Figura 1a; P = 0, 002, només els caucàsics, Figura 1b). Durant les primeres etapes de la infusió de dobutamina (és a dir, 0-30 μg kg −1 min −1 ), la mitjana de HR dels homozigots β 2- AR Glu27 va ser similar a la del genotip Gln / Glu. Tot i això, en les etapes posteriors del protocol d’infusió (és a dir, 40 μg kg −1 min −1 ), els homozigots de Glu27 van demostrar una resposta més elevada de HR a la dobutamina en comparació amb els que portaven un al·lel Gln27. També es va observar una diferència significativa en el patró de resposta de RH a la dobutamina en el temps entre els genotips de β 2 -AR codon 16 ( P = 0, 03, tots els pacients, Figura 2a; P = 0, 03, només els caucàsics, Figura 2b). Al llarg de la majoria del protocol d’infusió de dobutamina (és a dir, de 5-30 μg kg −1 min −1 ), els homozigots β 2- AR Gly16 van tenir una resposta de HR més baixa en comparació amb els portadors Arg16. És poc probable que aquestes diferències es deguessin a diferències de base per part del genotip, ja que no hi havia diferències significatives en la RH basal entre els grups genòtics β 2 -AR codon 27 o els grups genòtics codon 16. El patró de resposta a dosi i RH no va diferir significativament pel genotip β 1 -AR 389 o el genotip de codó 49 a tota la cohort d'estudi, ni tampoc quan es va analitzar només als caucàsics (dades no mostrades).

Image

( a ) Tots els pacients. Resposta de freqüència cardíaca (HR) a dobutamina mitjançant codi β 2- AR 27 Genotip Gln / Gln (cercles oberts), genotip Gln / Glu (cercles tancats) i genotip Glu / Glu (quadrats tancats). Els punts de dades es presenten com a mitjana ± se; P = 0, 002 per al patró general de canvi de RH entre genotips. ( b ) Només els caucàsics. Resposta de HR a dobutamina mitjançant codi β 2 -AR 27 Genotip Gln / Gln (cercles oberts), genotip Gln / Glu (cercles tancats) i genotip Glu / Glu (quadrats tancats) en tots els pacients. Els punts de dades es presenten com a mitjana ± se; P = 0, 002 per al patró general de canvi de RH entre genotips.

Imatge a mida completa

Image

( a ) Tots els pacients. Resposta de freqüència cardíaca (HR) a dobutamina mitjançant codi β 2 -AR 16 Genotip Arg / Arg (cercles oberts), genotip Arg / Gly (cercles tancats) i genotip Gly / Gly (quadrats tancats). Els punts de dades es presenten com a mitjana ± se; P = 0, 03 per al patró general de canvi de RH entre genotips. ( b ) Només els caucàsics. Resposta de HR a dobutamina mitjançant codi β 2 -AR 16 Genotip Arg / Arg (cercles oberts), genotip Arg / Gly (cercles tancats) i genotip Gly / Gly (quadrats tancats). Els punts de dades es presenten com a mitjana ± se; P = 0, 03 per al patró general de canvi de RH entre genotips.

Imatge a mida completa

Resposta arterial sistòlica durant la DSE

La pressió arterial sistòlica va ser més alta en els portadors de β 2- AR Gly16 en comparació amb els homozigots Arg16 durant tot el període de prova de la DSE ( P = 0, 06, tots els pacients, figura 3a; P = 0, 06, només els caucàsics, figura 3b), tot i que això sembla SBP superior a la línia de base d'aquest grup. La magnitud de la resposta de SBP a la dobutamina va ser similar entre els grups de genotips de β 2 -AR codon 16, mantenint així les diferències observades en la línia base. De més rellevància clínica és la de 16 pacients que van demostrar una resposta hipertensiva marcada a la dobutamina, definida com SBP 200 mm Hg, 15 (94%) d’aquests pacients portaven un al·lel Gly16. Les diferències de base en SBP que es van notar pel genotip del codó β 1 -AR 389 es van mantenir durant la infusió de dobutamina, tot i que aquestes diferències no van assolir significació estadística ( P = 0, 08, tots els pacients, dades no mostrades; P = 0, 12, només els caucàsics, dades no mostrades) No hi va haver diferències significatives en la resposta del SBP a la dobutamina per als polimorfismes β 1 -AR 49 o codó β -AR 27 a tota la cohort d'estudi, ni quan es van analitzar només pels caucàsics (dades no mostrades).

Image

( a ) Tots els pacients. Resposta arterial sistòlica (SBP) a la dobutamina mitjançant β 2 -AR cod gen 16 Genotip Arg / Arg (cercles oberts), genotip Arg / Gly (cercles tancats) i genotip Gly / Gly (quadrats tancats). Els punts de dades es presenten com a mitjana ± se; P = 0, 06. ( b ) Només els caucàsics. Resposta de SBP a dobutamina mitjançant codi β 2 -AR 16 Genotip Arg / Arg (cercles oberts), genotip Arg / Gly (cercles tancats) i genotip Gly / Gly (quadrats tancats). Els punts de dades es presenten com a mitjana ± se; P = 0, 06.

Imatge a mida completa

Resposta diastòlica a la pressió arterial durant la DSE

Al llarg de les proves de DSE, la DBP va ser significativament més alta en homozigots β 1- AR Arg389, en comparació amb els portadors de Gly389 ( P = 0, 02, tots els pacients, Figura 4a; P = 0, 02, només els caucàsics, Figura 4b). Això no va ser degut a diferències de genotip en la magnitud del canvi de DBP amb les dosis creixents de dobutamina, sinó més aviat a les diferències inicials en DBP que es van mantenir durant les proves de DSE. No hi va haver diferències significatives en la resposta de DBP pel codó β 1 -AR 49, codó β 2 -AR 16 o codó β 2 -AR 27 polimorfismes en el període de prova de DSE a tota la cohort d'estudi, ni quan es van analitzar només a les caucàsies ( dades no mostrades)

Image

( a ) Tots els pacients. Resposta de la pressió arterial diastòlica (DBP) resposta a la dobutamina pel genotip β 1 -AR 389 genotip Arg / Arg (cercles oberts) i portadors de Gly (cercles tancats). Els punts de dades es presenten com a mitjana ± se; P = 0, 02. ( b ) Només els caucàsics. Resposta de DBP a dobutamina mitjançant codi β 1 -AR 389 Genotip Arg / Arg (cercles oberts) i portadors de Gly (cercles tancats). Els punts de dades es presenten com a mitjana ± se; P = 0, 02.

Imatge a mida completa

Les dades hemodinàmiques estimulades per la Dobutamina també es van analitzar segons el nombre de còpies dels haplotips β 1 i β 2- AR. Igual que l’hemodinàmica de repòs, l’anàlisi d’haplotips no va ser més informatiu de l’hemodinàmica de resposta de dobutamina que l’anàlisi única SNP.

Discussió

Existeix una variabilitat en el pacient i la resposta arterial a la dobutamina. L’objectiu d’aquest estudi va ser determinar si la variabilitat interpatient en la resposta hemodinàmica es va associar a quatre polimorfismes seleccionats en els gens β 1 - i β 2 -AR. Les nostres dades suggereixen que els quatre polimorfismes β 1 - i β 2 -AR seleccionats no contribueixen substancialment a la variabilitat interpatient en la magnitud de la resposta de HR, SBP o DBP a dobutamina durant les proves de DSE. Es va trobar que els homozigots β 2- AR Glu27 tenien una resposta més elevada de HR a la dobutamina, però això només es va notar amb la dosi més alta, que molts pacients no arriben mai a la clínica. En la mateixa línia, els homozigots β 2 -Gly16 tenien HR inferiors durant les etapes mitjanes del protocol d’infusió de dobutamina (és a dir, 5-30 μg kg −1 min –1 ) en comparació amb els portadors Arg16. Tot i això, aquestes diferències ja no eren evidents en la dosi màxima de dobutamina (és a dir, 40 μg kg −1 min −1 ) i no van suposar un augment de la necessitat que l'atropina arribés a la RH objectiu. Durant les proves de DSE, també vam trobar que SBP i DBP eren més elevats en els portadors β 2 -AR Gly16 i homozigots β 1 -AR Arg389, respectivament. Aquestes diferències no es van deure a diferències en la magnitud de la resposta a la dobutamina, sinó al manteniment de les diferències de pressió arterial basal segons el genotip. No obstant això, això pot representar la troballa de major rellevància clínica ja que el 94% dels que presentaven una resposta hipertensiva marcada a la dobutamina (és a dir, la consecució d’un SBP 200 mm Hg) eren portadors d’un al·lel β 2- AR Gly16.

És interessant assenyalar que les nostres troballes relacionades amb el genotip de β 1 -AR codon 389 i la resposta SBP a dobutamina contrasten amb un altre estudi que va avaluar la resposta de dobutamina en presència de bloquejos parasimpàtics (és a dir, atropina) en voluntaris sans. 11 En aquest estudi anterior, els homozigots β 1- AR Arg389 van tenir un major augment de la resposta de SBP a dobutamina que els portadors de Gly389. En canvi, vam trobar que, tot i que la SBP era més alta durant les proves de DSE en homozigots β 1 -AR Arg389 en comparació amb els portadors de Gly389, això era probablement degut a diferències de pressió arterial inicial per genotip que es van mantenir durant la prova. A més, la magnitud de la resposta de SBP al nostre estudi no va diferir entre els grups genotipats. La diferència de troballes entre els dos estudis es pot atribuir a diferències en les poblacions avaluades (és a dir, en subjectes sans davant pacients sotmesos a proves clàssiques indicades de DSE). Tot i això, és més probable que la resposta parasimpàtica que es va produir en el nostre estudi atenui les diferències en la resposta de dobutamina per genotips que es van observar en l'estudi voluntari saludable, on el sistema parasimpàtic estava bloquejat per l'atropina.

L’efecte d’aquests polimorfismes en la resposta de RH i HR a la dobutamina en repòs també és d’interès. Quan es van descriure per primera vegada les conseqüències funcionals in vitro del polimorfisme del codó β 1 -AR 389, 1 hi havia una forta expectativa de que aquest genotip influís en la resposta de RH i HR a agonistes i antagonistes. Tot i això, no va ser el cas en el nostre estudi, ja que el genotip del codó 389 β 1 -AR no va influir en la resposta de HR estimulada per la dobutamina ni en la resta dels RH en la nostra població. Aquestes troballes concorden amb l'estudi de La Rosee et al. , 11 on el genotip del codó 389 β 1 -AR no va tenir cap efecte sobre la resposta de RH a la dobutamina durant les proves de DSE en voluntaris sans tractats amb atropina. A més, les nostres troballes són en gran mesura coherents amb la literatura del genotip del codó β 1 -AR 389 que no sembla influir en la resposta de RH a agonistes, antagonistes o exercicis del receptor β, ni sembla que afecti la RH en repòs. 4, 5, 6, 18, 19, 20, 21 En conjunt, aquestes dades de nombroses poblacions de pacients suggereixen que si bé els efectes funcionals del polimorfisme β 1 -AR 389 s’han documentat en nombrosos escenaris, sembla que ara pot ser. va concloure clarament que aquest polimorfisme no afecta la RH ni les seves respostes a agonistes, antagonistes o exercici.

Mereixen abordar les limitacions del nostre estudi. Per determinar si els polimorfismes β 1 - i β 2 -AR van influir en la variabilitat interindividual en la resposta hemodinàmica a la dobutamina durant la DSE, es va estudiar la resposta hemodinàmica a la dobutamina en un grup de pacients sotmesos a DSE clínicament indicada. Malgrat la naturalesa heterogènia de la nostra població de pacients, les nostres dades demogràfiques de referència suggereixen que la població estava ben equilibrada respecte a confusions com l'edat, el sexe, la història de la hipertensió i el tabaquisme. A causa de les diferències racials conegudes en les freqüències d'al·lel en el polimorfisme β 1 i β 2 -AR, la raça va ser inclosa com a covariada en anàlisis estadístiques de les dades de resposta hemodinàmica. A més, es van analitzar les dades de resposta hemodinàmica només als caucàsics. Les dades de resposta hemodinàmica dels caucàsics eren coherents amb les trobades a tota la cohort d’estudi. Com a tal, no sembla que l'estratificació de la població o les diferències racials en freqüències d'al·lel·les confonessin la nostra anàlisi. A més, com que el nostre estudi ha estat dissenyat per reflectir l'ús de dobutamina en la pràctica clínica, no hem pogut delimitar els efectes dels polimorfismos β 1 i β 2- AR sobre els efectes adrenèrgics purs de la dobutamina. Tot i això, el nostre estudi proporciona informació rellevant sobre les respostes hemodinàmiques diferencials a la dobutamina mitjançant un protocol clínic estàndard en una població de pacients que s’administra de forma rutinària al fàrmac.

En resum, el nostre estudi suggereix que els dos polimorfismes β 2 -AR seleccionats contribueixen poc a la variabilitat interpacient en la resposta de RH a la dobutamina en el marc clínic i, per tant, probablement tindrien poc valor clínic en la predicció de la resposta HR de dobutamina. En termes de resposta a la pressió arterial, els nostres resultats van revelar que el genotip β 2 -AR codó 16 va influir en la pressió arterial inicial i pot ser un indicador de pacients predisposats a tenir una resposta hipertensiva marcada al dobutamina. Es requereixen estudis addicionals que explorin aquesta associació. Les diferències de troballes entre el nostre estudi i un altre que estudia la resposta de dobutamina durant el bloqueig parasimpàtic posen de manifest l'estreta interacció i regulació de l'hemodinàmica per part dels sistemes nerviosos simpàtics i parasimpàtics, i suggereixen que un sistema pot ajudar a compensar les conseqüències dels polimorfismes genètics en un altre sistema.

Materials i mètodes

Estudiar disseny

Aquest estudi es va realitzar en pacients de 18 anys d’edat que estaven sotmesos a DSE clínicament indicats a l’Hospital Shands de la Universitat de Florida. L’estudi va ser aprovat pel Comitè de Revisió Institucional de la Universitat de Florida i tots els subjectes van donar el seu consentiment per escrit. Després d’obtenir el consentiment, els investigadors de l’estudi van realitzar una breu entrevista a pacients i es va registrar la indicació de DSE, medicaments concomitants i estats de malaltia concomitants. Els pacients van quedar exclosos de l'estudi si havien pres un β-bloquejador en quatre setmanes de vida abans del test de DSE. Les indicacions per a la DSE van incloure una avaluació del dolor de tòrax, l’autorització mèdica preoperatòria o l’avaluació del pretransplantament (ronyó, fetge, pulmó o cor). En el moment de la prova de la DSE, es va obtenir una mostra de sang de 5 ml o mostra de rentat bucal de 15 ml per part de cada pacient per a anàlisis genètiques.

La DSE la va realitzar una infermera capacitada mitjançant un protocol hospitalari estàndard anteriorment descrit. 16 Breument, la dobutamina es va administrar per via intravenosa a una taxa de dosi inicial de 5 μg kg −1 min −1 . La taxa de dosi de dobutamina es va qualificar a intervals de 3 min a 10, 20, 30 i 40 μg kg −1 min −1 . La infusió es va acabar quan el pacient va assolir la RH objectiu, calculada com el 85% de la RH màxima prevista per edat (definida com a 220 menys d'edat en anys). Si no es va assolir la RH objectiu després de la dosi de 40 μg kg −1 min −1, es va administrar per via intravenosa 0, 25–1 mg atropina. La infusió de dobutamina també es va acabar si el pacient va desenvolupar isquèmia miocàrdica, compromís hemodinàmic o símptomes intolerables. Es va mesurar la RH (basada en electrocardiograma de 12 ploms) i la pressió arterial (mitjançant un ProPak 104EL; Protocol Systems Inc., Beaverton, OR, EUA) a la línia inicial (després d’un període de descans), a l’inici del període d’infusió de dobutamina i a el final de cada increment de la infusió de dobutamina de 3 minuts. Els investigadors de l'estudi van registrar dades de RH i pressió arterial durant les proves de DSE i van quedar cecs al genotip de cada pacient en el moment de la gravació de dades.

Mètodes de genotipat

Després de la DSE, es va aïllar ADN genòmic de mostres de sang sencera o de rentes bucals mitjançant un kit disponible comercialment (Puregene; Gentra Systems, Minneapolis, MN, EUA). Els genotips es van determinar mitjançant un dels tres mètodes: Orchid BioSciences Inc. (Princeton, NJ, EUA), tecnologia exclusiva d’extensió d’imprimació única (SNP-IT), pirosquenció o polimerasa cadena de reacció-restricció de la restricció de la longitud del fragment de polimorfisme (PCR-RFLP) . L’única extensió d’imprimació 22 es va utilitzar per genotipar el 73.5, el 68, 6, el 77, 7 i el 89, 1% de les mostres per al codó β 1 -AR 389, el codó β 1- AR 49, el codó β 2- AR 16 i el codó β 2- AR 27, respectivament. La pirosegonació es va utilitzar per genotipar el 15, 9% de les mostres per al codó β 2 -AR 16. La PCR-RFLP es va utilitzar per al genotip 26, 5, 31, 4, 6, 4 i 10, 9% de les mostres per al codó β 1 -AR 389, β 1- AR codó 49, β 2- AR codó 16 i β 2 -AR codó 27, respectivament. La PCR-RFLP per als codons β 1 -AR 49 i 389 es va realitzar segons els mètodes descrits anteriorment mitjançant els enzims de restricció NI Sau 96I i Bst , respectivament. 23 PCR-RFLP per als codons β 2 -AR 16 i 27 es va realitzar segons mètodes descrits anteriorment, mitjançant els enzims de restricció Nco I i BbV I, respectivament. 24 El protocol RFLP per als codons β 2 -AR 16 i 27 es va modificar per consistir en 20 μl de reaccions que contenien 5 µl de producte PCR, 5 U de Nco I (per a codó β 2- AR 16) o 3 U de BbV I (per β 2- AR codó 27), digerit durant 2 h a 37 ° C. Dos investigadors independents van puntuar els genotips.

Anàlisi estadística

A partir de les freqüències d’al·lels, s’esperava que el nombre d’homozigots β 1 -AR Gly49 i homozigots Gly389 fos baix. Com a tal, es va planejar a priori que els homozigots de Gly es combinessin amb heterozigots per a cada polimorfisme β1-AR. Per exemple, els portadors β 1 -AR Gly389 eren aquells amb el genotip Arg389Gly o el genotip Gly389Gly. Les freqüències del genotip es van determinar mitjançant el recompte d’al·lels i es va provar l’equilibri de Hardy – Weinberg mitjançant l’anàlisi χ 2 . Les característiques basals categòriques es van comparar entre grups que utilitzen proves χ 2 . Les característiques basals es van comparar mitjançant les proves de test no comparades de Student per a les dades de polimorfisme β 1 -AR i l’anàlisi d’unidireccional de la variància (ANOVA) per a les dades de polimorfisme β 2- AR. Després d'ANOVA, es va realitzar una anàlisi post-hoc utilitzant les diferències menys importants t- test. Els canvis induïts per la Dobutamina en RH, SBP i DBP van ser analitzats pel mètode de procediments mixtes (PROC MIXED) en SAS per tenir en compte el disseny de mesures repetides de l'estudi. La raça / ètnia (caucàsic, negre, hispà i altres) es va incloure com a covaria en l'anàlisi PROC MIXED. Les estructures de covariància PROC MIXED utilitzades eren simetria composta, ordre autoregressiu 1 i no estructurades. Per a determinar quin dels tres models d'estructura de covariància cal seleccionar per a la inferència final, es van utilitzar dos criteris d'adaptació al model, els criteris d'informació d'Akaike i el de Baywarian de Schwarz. A causa de les diferències racials conegudes en les freqüències d'al·lel en el polimorfisme β 1 i β 2 -AR, es van analitzar dades hemodinàmiques i els canvis induïts per dobutamina en RH, SBP i DBP també en els pacients caucàsics. Totes les dades es van analitzar utilitzant un nivell de significació de dues cares de 0, 05. Les dades es van analitzar mitjançant SAS 8.2 (SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA) i SPSS 14.0 per a Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA).

Glossari

DSE

Ecocardiografia per estrès de dobutamina

RRHH

ritme cardíac

SBP

pressió arterial sistòlica

DBP

pressió arterial diastòlica

Dualitat d’interès

Cap declarat.