La neuritina pot normalitzar els dèficits neuronals de la malaltia d’Alzheimer | mort i malaltia cel·lular

La neuritina pot normalitzar els dèficits neuronals de la malaltia d’Alzheimer | mort i malaltia cel·lular

Anonim

Temes

  • Malaltia d'Alzheimer
  • Senyalització cel·lular

Resum

Es creu que les reduccions de la complexitat de la neuritis hipocampal i la plasticitat sinàptica contribueixen a la deterioració progressiva de la memòria episòdica i al lleu descens cognitiu que es produeix especialment en les primeres etapes de la malaltia d’Alzheimer (AD). Malgrat la importància funcional i terapèutica per a pacients amb TDA, no es garanteix la intervenció per rescatar o normalitzar l’elaboració dendrítica i la plasticitat sinàptica. Aquí mostrem que la sobreexpressió de neuritina , una proteïna que depèn de l’activitat, va afavorir l’abordatge de la neurita i la maduració de les sinapsis en paral·lel amb la transmissió sinàptica basal millorada en les neurones de l’hipocamp. És important destacar que l’aplicació exògena de neuritina recombinant va restablir la complexitat dendrítica completament així com la densitat de la columna vertebral en les neurones hipocampals preparades a partir de ratolins Tg2576, mentre que no va afectar la ramificació de neurones de les seves brutes de tipus salvatge. També vam demostrar que la neuritina recombinant soluble, en infundir-se de manera crònica als cervells de ratolins Tg2576, va normalitzar la plasticitat sinàptica en les rodanxes agudes d’hipocamp, provocant una potenciació intacta a llarg termini. Al revelar les accions protectores de la neuritina soluble contra els defectes neuronals relacionats amb l’AD, proporcionem un enfocament terapèutic potencial per a pacients amb TDA.

Principal

Les comunicacions neuronals eficients a través de les sinapsis són crucials per a les funcions cerebrals normals, mentre que les alteracions en el nombre de sinapsis, la morfologia de la columna vertebral dendrítica i la complexitat dendrítica es reflecteixen per diferents formes de plasticitat sinàptica i també s’associen causalment amb una varietat de trastorns neurològics. 1, 2, 3, 4, 5 Per exemple, la pèrdua de sinapsis i l’atròfia de la neuritis són els principals substrats neurobiològics subjacents a un deteriorament de la memòria en malalties neurodegeneratives com la malaltia d’Alzheimer (AD). 6, 7 La major deslocalització dendrítica de la proteïna tau hiperfosforilada, una proteïna associada a microtúbuls enriquida en axons de neurones madures, 8 i l'abundància de formes oligomèriques solubles de β- amiloide (A β ) semblen provocar defectes sinàptics i disrupció de la plasticitat sinàptica. que implica la progressió de la patologia del TCA. 6, 9, 10 L’aparent disminució dels factors neurotròfics observats en cervells de pacients amb AD 11 ha impulsat diversos assaigs per a l’administració de factors neurotròfics, com el factor neurotròfic derivat del cervell (BDNF), per atenuar i possiblement revertir defectes sinàptics. 11, 12, 13 Tanmateix, la truncada o la disminució de l’expressió dels seus receptors cognats en cervells d’AD han limitat el seu ús potencial com a terapèutica per a l’AD. 12, 14, 15

La neuritina, també coneguda com el gen de la plasticitat candidata 15, es va identificar originalment en un estudi de cribratge de gens regulats per activitat i posteriorment es va trobar que era una de les molècules senyalitzadores aigües avall fins a BDNF i el seu receptor de quinasa relacionat amb la tropasiosina tipus B. 16, 17 Estudis successius van indicar que la neuritina també es pot induir per convulsions experimentals o per experiències de vida normals, com ara estimulació i exercici sensorial. 17, 18, 19, 20, 21, 22 Situat a l'interval 6p24-p25 del cromosoma 6, 23, el gen de la neuritina codifica una proteïna petita i molt conservada que conté una seqüència de senyal secretora al N-terminus i una seqüència de consens per al glicosilfosfatidilinositol ( GPI) al terminal C. 16 Aquest enllaç GPI permet que la neuritina s’ancori a les superfícies cel·lulars i, després de la clivada de la GPI per fosfolipasa, la neuritina soluble resultant s’allibera a l’espai extracel·lular. 16, 20, 24, 25, 26

Durant el desenvolupament neuronal embrionari, la neuritina s’expressa principalment en regions cerebrals que experimenten una ràpida proliferació de piscines progenitores neuronals, cosa que suggereix un paper protector de la neuritina per a les neurones diferenciades. 26, 27 Curiosament, el nivell d’expressió de neuritina es manté elevat després del part o fins i tot augmenta, especialment en les regions cerebrals que presumiblement presenten una elevada activitat neuronal i plasticitat sinàptica, com l’hipocamp, la còrtex visual i la capa granular externa del cerebel. 16, 19, 20, 26 A més, la neuritina afavoreix el creixement de l’arbor neurític i la formació sinàptica. 16, 20, 24, 25, 28, 29, 30, 31 Tot i que diversos estudis han suggerit aquestes potents activitats neuritogenètiques de la neuritina, la contribució de l’expressió de la neuritina o la seva efectivitat contra malalties neurodegeneratives que presenten atrofia de neurites i pèrdua de sinapsi ha estat en gran mesura inexplorada. .

Aquí vam determinar que l’expressió de la neuritina augmentava la complexitat de les neurites i va promoure la maduració de les espines individuals en cultius neurones de l’hipocamp. D’acord amb aquestes troballes, la transmissió sinàptica basal es va millorar mitjançant l’expressió transitòria de la neuritina. És important destacar que, quan s’aplica de forma exògena, el pèptid de neuritina soluble va rescatar la complexitat de la dendrita de les neurones preparades a partir de ratolins Tg2576, un model de ratolí transgènic d’AD, de manera que la complexitat era comparable a la de ratolins de tipus salvatge (WT) i també es va normalitzar la plasticitat sinàptica en l'hipocamp dels ratolins Tg2576. Combinats, aquests resultats suggereixen que la neuritina, particularment una forma soluble de neuritina, reverteix els defectes sinàptics manifestats en els ratolins Tg2576 i que les manipulacions per augmentar els nivells de neuritina poden ser enfocaments terapèutics beneficiosos en el TCA.

Resultats

La neuritina augmenta el creixement de neurites

La neuritogènesi és un procés cel·lular clau que esculpeix els circuits neuronals controlant els arbres axonals i les branques dendrítiques durant el desenvolupament neuronal, i també contribueix a la remodelació de la connectivitat neuronal que es basa en la plasticitat sinàptica en l'edat adulta. 32 Aquest procés està controlat no només per factors intrínsecs cel·lulars, sinó també per factors extrínsecs implicats en l’activitat sinàptica. S'ha demostrat que la neuritina és un regulador potent per a la neuritogènesi in vitro i in vivo . 16, 24, 26 Per validar l'efecte neuritogenètic de la neuritina en neurones cultivades, vam transfectar neurones amb neuritina de longitud completa (PIRES-eGFP-neuritin-Flag) 26 o el seu vector de control. A mesura que el creixement de les neurites comença a principis del desenvolupament postnatal, 29, 33 neurones hipocampals en cultiu van ser transfectades als 3 dies in vitro (DIV) i analitzades tres dies després. Aquelles neurones transfectades es van identificar amb l’expressió d’eGFP o neuritin-Flag que es va etiquetar amb Alexa Fluor 488, perquè la intensitat del senyal d’eGFP de PIRES-eGFP-neuritin-Flag tendia a ser feble. Els processos axonals i dendrítics es van discriminar amb la proteïna 2 associada a Tau-1 i microtúbuls (MAP2), respectivament (figures 1a i b). 8 Es van adquirir i tornar a muntar una sèrie d’imatges confocals per dilucidar estructures neuronals senceres. En comparació amb les neurones transfectades amb el vector de control, l’expressió de neuritina durant 3 dies va augmentar substancialment tant l’axonal total (*** P <0, 001, la prova de Mann-Whitney U ; les figures 1a i c) com les longituds dendrítiques totals (*** P = 0, 0005, Test Mann – Whitney; figures 1b i d).

Image

L’expressió de neuritina augmenta el creixement de neurites. ( a i b) Imatges confocals de neurones que expressen vector o control de neuritines que es van co-immunostenir amb eGFP sol o eGFP / Flag (verd), Tau-1 ( a, vermell) o MAP2 ( b, vermell). Barra d’escala, 100 nm. Els insectes són × 6.9 vistes magnificades de les regions designades. Longitud axonal total ( c : Control, 1017, 13 ± 112, 96 μ m, n = 19 neurones vers Neuritina, 2555, 57 ± 341, 08 μ m, n = 26 neurones) i longitud dendrítica ( d : Control, 709, 35 ± 78, 79 μ m, n = 23 neurones contra Neuritina, es descriuen 1446, 69 ± 171, 17 μm, n = 30 neurones) de neurones que expliquen el control i la neuritina. ( e ) Anàlisis de sholl per a neurites visualitzades amb tinció de bandera. La neuritina va desaccelerar la taxa de disminució dels números creuats (a 30 μ m: Control, 5, 64 ± 0, 76 enfront de la neuritina, 7, 88 ± 0, 71, * P = 0, 0402; a 40 μ m: 4, 86 ​​± 0, 93 contra 7, 13 ± 0, 58, * P = 0, 0415; a 60 μ m: 3, 57 ± 1, 06 enfront de 7, 19 ± 0, 77, ** P = 0, 0011; a 70 μ m: 3, 57 ± 0, 97 contra 6, 94 ± 0, 91, ** P = 0, 0053; a 80 μ m: 2, 64 ± 0, 88 contra 4, 25 ± 1, 06, *** P = 0, 0004; a 90 μ m: 2, 64 ± 0, 82 contra 5, 94 ± 0, 62, ** P = 0, 0018; a 100 μ m: 2, 27 ± 0, 63 contra 5, 71 ± 0, 68, ** P = 0, 0018; a 110 μ m : 1, 79 ± 0, 55 enfront de 5, 44 ± 0, 61, *** P = 0, 0009; a 120 μ m: 1, 91 ± 0, 51 enfront de 4, 69 ± 0, 58, ** P = 0, 0012). La importància estadística s’expressa com a * P <0, 05; ** P <0, 01; *** P <0, 001

Imatge a mida completa

La complexitat neurònica també és important per a l’activitat neuronal a través de circuits neuronals, perquè la complexitat afecta la propagació del potencial d’acció, així com el tret intrínsec. 34, 35 Així, es va contar el nombre d’interseccions neurítiques per cercles concèntrics amb els radi augmentant en 10 μ m (anàlisi Sholl) 36 per analitzar quantitativament la complexitat dels arbres neurítics. En les neurones amb transfeccions vectorials de control, els nombres d'intersecció van assolir un pic de 30 μm del soma i després van disminuir contínuament (Figura 1e). Tal com s’observa en les neurones tectals òptiques o neurones motores de Xenopus laevis , la neuritina 24, 25, 28 va augmentar el nombre d’interseccions en un 40% al pic i després va atenuar la taxa de disminució (figura 1e). Aquests resultats van indicar clarament que l’expressió transitòria de la neuritina va promoure el creixement tant dels processos axonals com dendrítics i va augmentar dràsticament la complexitat dels arbres neurítics. Tot i que hem valorat l’activitat neuritogenètica de la neuritina en un estadi de desenvolupament primerenc (6 DIV), l’expressió regulada de la neuritina pot modular l’elaboració neurítica i, al seu torn, pot afectar la qualitat i la quantitat de transmissió sinàptica fins i tot en etapes posteriors.

La neuritina afavoreix la maduració sinàptica

Es va demostrar que la neuritina millora l’elaboració dendrítica i la sinaptogènesi, 27, 30, 31, però encara es desconeix si l’expressió de la neuritina té un impacte en la maduració de les sinapsis de mamífers. Així, es va analitzar la morfologia de les espines individuals i la densitat de la columna vertebral després de la transfecció a 9 DIV i una incubació addicional de 14 dies. La transfecció de DsRed monomèric ens va permetre visualitzar i analitzar quantitativament les estructures dendrítiques de la columna vertebral independent de l’expressió de la neuritina. Les neurones amb expressió de neuritina van mostrar un augment en la densitat de la columna vertebral en comparació amb les neurones de control (* P = 0.0134, test de la t que no es compara; figures 2a i b – 1).

Image

L’expressió neuritina millora la maduració de les espines. ( a ) Imatges representatives d'un vector de control (esquerre) o de neuronines (a la dreta) que expressen neurones immunostingudes amb eGFP / Flag i (verd, superior) i simultàniament etiquetades DsRed monomèric (mDsRed, vermell, mig). Les imatges de fluorescència es fusionen (part inferior). Barra d’escala, 10 μ m. ( b ) Es mesuren els nombres de columna vertebral per cada 10 μ m ( b – 1 : Control, 9, 73 ± 0, 83 vers Neuritina, 12, 86 ± 0, 90) i es classifiquen en els seus subtipus ( b – 2 : Classe I: Control, 1, 85 ± 0, 18 vers Neuritina, 2, 53 ± 0, 22; Classe II: 3, 88 ± 0, 43 contra 6, 23 ± 0, 51; Classe III: 3, 20 ± 0, 36 vers 3, 26 ± 0, 38; Classe IV: 0, 80 ± 0, 09 vers 0, 84 ± 0, 12) del vector de control ( n = 31) i que expressa neuritina ( n = 34) neurones. ( c ) Els gràfics de tocs que mostren la freqüència en què s’observen cada tipus d’espines. ( d ) Diagrames de probabilitat acumulats per diàmetres de capçal vertebral ( d – 1 ) i longituds de columna vertebral ( d – 2 ). Insets: es mostren els diàmetres mitjans del capçal vertebral (Control, 0, 86 ± 0, 1 μ m enfront de la neuritina, 0, 97 ± 0, 01 μ m) o longituds de la columna vertebral (1, 78 ± 0, 03 μ m enfront de 1, 79 ± 0, 02 μ m), respectivament. Per a ( c i d ), s'utilitzen 1345 espines de 31 neurones que expressen vector control i 2245 espines de 34 neurones que expressen neuritina. La significació estadística s’expressa com a * P <0, 05 i *** P <0, 001

Imatge a mida completa

La forma d’una columna vertebral dendrítica es modifica notablement per l’activitat sinàptica que s’imposa i, per tant, la signatura estructural pot representar eficàcia sinàptica. 2, 3, 4, 37 Les columnes es van classificar en quatre classes en funció del diàmetre del cap de la columna vertebral (amplada) i longitud, abastant el cap i el coll: I – IV: tossut, bolet, prim i filopodia, respectivament. 3, 37, 38 Cada classe de columna vertebral té una funció diferent en la transmissió sinàptica i contribueix de manera diferent a la plasticitat sinàptica; les espines de bolets acostumen a ser més funcionalment competents que les altres. 5 Quan vam classificar espines individuals (vegeu els Materials i els Mètodes per a criteris detallats), 38 neurones que expressen la neuritina van mostrar un nombre significativament augmentat d’espines de la classe I (* P = 0.0269, test Mann – Whitney U ) i de la classe II ( *** P <0, 001) en comparació amb el control. Per contra, l’expressió de neuritina no va afectar el nombre d’espines de la classe III ( P = 0, 8696) o de la classe IV ( P = 0, 7775) (figures 2b – 2). En conseqüència, del total de protuberàncies, la proporció d'espines de classe II es va incrementar un ~ 10%, amb lleus disminucions de les proporcions d'espines de classe III i classe IV (figura 2c). Afavorint l’augment de la proporció d’espines de classe II, l’expressió de neuritina va donar lloc a un augment del diàmetre mitjà del capçal total de la columna vertebral (*** P <0, 001, prova de Kolmogorov – Smirnov; Figures 2d – 1) però no va afectar la longitud de la columna vertebral ( P = 0.1344, prova de Kolmogorov – Smirnov; figures 2d – 2). En consonància amb les nostres dades, les espines de bolets (classe II) de les neurones de la còrtex visual eren menys abundants en els ratolins que mancaven de neuritina que els que hi havia a les escombraries WT. Per tant, probablement la neuritina té un paper en l'estabilització de sinapsis funcionalment madures o, possiblement, en la facilitació de la maduració d'espines dendrítiques.

La neuritina millora la transmissió sinàptica basal

La promoció del creixement neurític i la maduració de la columna vertebral dendrítica van suggerir que la neuritina pugui controlar la funcionalitat de les connexions sinàptiques. Com en les anàlisis morfològiques de les columnes vertebrals, les neurones hipocampals van ser transfectades amb vectors control o neuritina a 9 DIV i incubades durant 14 dies addicionals. Per mesurar les respostes sinàptiques quàntiques, es van registrar corrents miniatics postsinàptics excitatius (miniEPSCs), principalment α -amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazolepropiónic (AMPA) miniEPSC mediats per receptor, amb un potencial de retenció de -70 mV ( Figura 3a). L’amplitud dels miniEPSCs representa la mida quantal normalment derivada del contingut del transmissor vesicular o de l’abundància del receptor AMPA postsinàptic, mentre que els canvis en la freqüència dels miniEPSCs signifiquen alteracions en la probabilitat d’alliberament de les vesícules presinàptiques o en el nombre de sinapsis que contenen receptors AMPA. 39 És important destacar que la neuritina va augmentar significativament la freqüència dels miniEPSCs en comparació amb la dels controls (** P = 0.007, test Mann – Whitney U ; figures 3b i c), però no va afectar l'amplitud dels miniEPSCs ( P = 0.3, Mann-Whitney Test U ; figures 3b i c). També es va observar un augment en la freqüència de miniEPSC en les neurones tectals òptiques de X. laevis que expressaven víricament la neuritina. Per tant, aquestes dades indiquen que la neuritina augmenta el nombre de sinapsis funcionals, possiblement promovent la maduració de les sinapsis.

Image

L’expressió de neuritina augmenta la freqüència de miniEPSC en cultius neurones de l’hipocamp. ( a ) Rastres representatius de miniEPSCs enregistrats a partir de neurones hipocampals que exprèn el vector control (superior) - o la neuritina (inferior). Calibratge: 20 pA i 200 ms. ( b ) Esquemes de probabilitat acumulats d'amplituds de miniEPSC (superior) i intervals entre esdeveniments (inferior). ( c ) L'amplitud mitjana miniEPSC (superior: Control, 11, 7 ± 0, 4 pA versus Neuritina, 12, 7 ± 0, 7 pA) i la freqüència miniEPSC (inferior: 1, 2 ± 0, 2 Hz vers 2, 08 ± 0, 2 Hz) es comparen entre el vector de control- ( n = 10) i neuritines- ( n = 13) que expressen neurones. La importància estadística s’expressa com a ** P <0, 01

Imatge a mida completa

La neuritina soluble prevé l’atròfia dendrítica en les neurones hipocampals de ratolins Tg2576

La funció autònoma no cel·lular exercida per la neuritina suggereix que actua com a lligant en receptors desconeguts. 24, 25 De fet, es va demostrar que la neuritina existia sobretot com a forma secretada soluble in vivo , 26 i diversos estudis van indicar que aquesta forma soluble tenia efectes neurotròfics en neurones de mamífers. 16, 26, 27 L’atròfia neurítica s’observa típicament tant en el cervell de pacients amb AD com en models d’AD, 40 i es recapitulen fàcilment en neurones cultivades preparades a partir de ratolins Tg2576. 41 Per elaborar una afectació potencial de la neuritina a l’atròfia neurítica, es va mesurar el nivell d’ARNm de neuritina a l’hipocampi de ratolins Tg2576 de 6 mesos d’edat, que va revelar una disminució de l’ARNm de neuritina en comparació amb la del control del litórmol WT (** P = 0.0079, t- test no aparellat; Figura 4a). Així doncs, vam decidir examinar si l’augment de neuritina ofereix una acció protectora per a l’elaboració dendrítica en neurones d’hipocamp cultivades de ratolins Tg2576 o dels seus matèrics. Per controlar adequadament la concentració de neuritina al llarg dels experiments següents, vam aplicar de manera exògena un pèptid de neuritina recombinant, una neuritina soluble a 150 ng / ml, 16, 27, 42, en lloc de sobreexpressar la neuritina de longitud completa. Per a la visualització de branques dendrítiques senceres, es va utilitzar el virus de la ràbia que codifica eGFP (SADΔG eGFP) 43 i es va analitzar tant l'arborització dendrítica mitjançant l'anàlisi de sholl com la densitat de la columna vertebral després del tractament de neuritines (figura 4b). Inesperadament, el pèptid de neuritina soluble no va afectar l'arborització dendrítica a les neurones de control del WT a cap distància del soma (Figures 4c-e i Taula complementària 1), que es diferenciava dels nostres resultats amb l'expressió transitòria de la neuritina de longitud completa (figura 1). Els números 24, 25, 28, 30 tampoc es van canviar pel tractament del pèptid de neuritina ( P > 0.05, ANOVA unidireccional amb Bonferroni post hoc ; figures 4f i g).

Image

El pèptid de neuritina soluble prevé l’atròfia neurítica de les neurones dels ratolins Tg2576. ( a ) Els nivells d'ARNm de neuritina es descriuen de l'hipocampi de ratolins Tg2576 i WT de 6 mesos després de la normalització als de les escombraries WT (WT, 1 ± 0, 0201 vers Tg2576, 0, 8340 ± 0, 0177, n = 5 ratolins, respectivament ). ( b ) L'esquema experimental per al tractament de pèptids i neurotines. ( c ) Imatges representatives de neurones hipocampals que expressen eGFP preparades a partir de Tg2576 o dels seus ratolins WT littermate després del tractament de pèptid de neuritina recombinant (150 ng / ml 16, 27, 42 ) o vehicle (PBS com a control). Barra d’escala, 50 μ m. ( d ) Les anàlisis de sholl es realitzen per mesurar els creuaments de branques dendrítiques amb els cercles distanciats designats del soma. La importància estadística entre el control WT vers el Tg2576-control s'expressa com a * P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001, mentre que la comparació entre Tg2576-Control vers Tg2576-Neuritina s'expressa com P <0.05, ‡‡ P <0, 01. ( e ) Nombre total d'encreuaments fins a la branca marginal, ~ 120 μ m es representa per a cada grup. Control WT, 286, 8 ± 11, 3 vers WT-Neuritina, 320, 4 ± 11, 1 vers Tg2576-Control, 182, 3 ± 16, 6 vers Tg2576-Neuritina, 253, 3 ± 14, 1, n = 11 neurones, respectivament. ( f ) Es presenten imatges representatives de dendrites marcades amb eGFP de neurones Tg2576 i WT després del tractament de neuritina o vehicle recombinant (PBS com Control). Barra d’escala, 10 μ m. ( g ) Nombre total d’espines per cada 10 μ m de cada grup. Control WT, 8, 69 ± 0, 37 vers WT-Neuritina, 8, 78 ± 0, 33 vers Tg2576-Control, 5, 48 ± 0, 37 vers Tg2576-Neuritina, 8, 68 ± 0, 46, n = 11 neurones, respectivament. Les comparacions múltiples que utilitzen el test de Bonferroni post hoc després d'ANOVA revelen una disminució marcada del nombre total d'encreuaments ( e ) i del nombre de columna vertebral ( g ) de les neurones de Tg2576 en comparació amb les d'altres grups. La importància estadística s’expressa com a ** P <0, 01 i *** P <0, 001

Imatge a mida completa

En consonància amb un informe anterior, 41 neurones aïllades dels ratolins Tg2576 van mostrar una sobredimplicació en els seus arbres dendrítics, com ho demostra el nombre disminuït significativament de les travesses dendrítiques totals (*** P <0.001, ANOVA unidireccional amb Bonferroni post hoc ; Figura 4e ) i espines (*** P <0, 001; figures 4f i g) en comparació amb els dels ratolins de control WT. És important destacar que el tractament de les neurones de ratolins Tg2576 amb pèptid de neuritina soluble va atenuar notablement la disminució de l’elaboració dendrítica (Tg2576-Neuritina vers Tg2576-Control, ** P = 0.0036; Figura 4e) i la formació sinàptica (*** P <0.001; Figura 4g), i fins i tot ho va revertir gairebé fins al nivell de l'observat en les neurones del WT ( P > 0, 05 tant en els encreuaments dendrítics com en els números de columna vertebral; Figures 4e i g, respectivament), d'acord amb la nostra observació recent. 44 Per examinar més l’eficàcia de la neuritina, vam tractar neurones Tg2576 amb concentracions creixents de neuritina soluble. La complexitat dels processos neurítics de les neurones de Tg2576 es va incrementar de forma dependent de la dosi al pèptid de neuritina usat i era comparable al nivell de control, sobretot a partir dels 150 ng / ml (figura suplementària 1). Per tant, probablement la neuritina soluble té un paper protector contra la degeneració dendrítica manifestada en models d’AD i possiblement en pacients amb TDA.

La neuritina soluble rescata la plasticitat sinàptica de l’hipocamp en ratolins Tg2576

Alguns models animals de malalties d’AD presenten dèficits en la plasticitat sinàptica dels circuits hipocampals, degut principalment a les activitats sinaptotòxiques de la β oligomèrica. 45, 46, 47, 48 Per exemple, la potenciació a llarg termini (LTP), un representant electrofisiològic de l’enfortiment sinàptic en les connexions neuronals subjacents a l’aprenentatge i la memòria, 49 a l’hipocamp dels ratolins Tg2576 està greument deteriorat als 6 mesos d’edat que concorre amb un augment intens del pèptid A β tòxic i dèficits de memòria. 50, 51, 52, 53 Tenint en compte el paper neuroprotector observat de la neuritina soluble així com un informe recent que la neuritina va millorar les habilitats cognitives en els ratolins Tg2576, 44 vam raonar que la neuritina soluble podria tenir un impacte en la LTP en els ratolins Tg2576.

Inicialment, vam comparar la LTP a la via col·lateral de Schaffer de les rodanxes agudes d’hipocamp de ratolins Tg2576 de 6 mesos amb la que hi havia a les seves cames de WT. En consonància amb els informes anteriors, 47, 50 LTP es van veure deteriorats de manera significativa en els ratolins Tg2576 en comparació amb els ratolins WT (*** P = 0, 00004, la prova t no comparada; les figures 5a i c). Per abordar la possibilitat que la neuritina soluble afectés aquest dèficit de LTP, vam introduir un pèptid de neuritina recombinant als cerebroventricles de ratolins Tg2576 de 6 mesos amb bombes osmòtiques durant dues setmanes i després vam examinar el LTP. Vam trobar que aquesta infusió crònica de neuritina soluble als cervells de ratolins Tg2576 va rescatar LTP, mentre que els ratolins Tg2576 que havien rebut líquid cefalorraquidi artificial (aCSF) sols encara presentaven deterioracions en LTP (* P = 0.03346; Figures 5b i c). De fet, la magnitud del LTP derivat dels ratolins Tg2576 infundits amb neuritina soluble era comparable a la dels ratolins WT (Tg2576-Neuritina vers WT, P = 0, 438; figura 5c). En conjunt, aquests resultats indiquen que la neuritina soluble restableix funcionalment la plasticitat sinàptica, probablement per la seva activitat neuroprotectora a nivell del circuit.

Image

La neuritina soluble rescata la LTP als hipocamps dels ratolins Tg2576. ( a ) LTP a la via col·lateral de Schaffer de camitons WT de 6 mesos i ratolins Tg2576. Els EPSP de camp es van registrar a la regió CA1 de les rodanxes agudes d’hipocamp i el TBS va ser induït per TBS, es va denominar com a fletxa negra. El LTP s’expressa com a mitjana ± SEM% de les pistes inicials dels fEPSP registrats durant almenys un període base de 20 minuts. Els insectes mostren traces representatives en els punts de temps coincidents (Calibració: 1 mV i 10 ms). ( b ) LTP de ratolins Tg2576 que es van sotmetre a la infusió osmòtica de aCSF o de pèptid de neuritina recombinant. Fletxa, insercions i calibratge com a. ( c ) Un histograma resum per a la potenciació sinàptica a 1 h després de la inducció de LTP en a i b . La magnitud de LTP en ratolins Tg2576 va disminuir significativament (WT, 166, 8 ± 10, 9%, n = 8 rodanxes de 3 ratolins enfront de Tg2576, 101, 4 ± 4, 8%, n = 9 rodanxes de 3 ratolins), però es va reprendre per infusió osmòtica de pèptid de neuritina soluble. (Tg2576-Control, 100, 5 ± 4, 9%, n = 12 llesques de 4 ratolins enfront de Tg2576-Neuritina, 146, 3 ± 22, 2, n = 9 llesques de 4 ratolins). La significació estadística s’expressa com a * P <0, 05 i *** P <0, 001

Imatge a mida completa

Discussió

Els rols funcionals de la neuritina en el sistema nerviós en desenvolupament han estat estudiats àmpliament, mentre que les accions fisiològiques de la neuritina sobre les característiques sinàptiques, particularment les associades a malalties neurodegeneratives, continuen sent en gran part desconegudes. A continuació, es van avaluar els efectes promocionals de la neuritina en l'elaboració de les neurites, la maduració de la columna dendrítica i la transmissió sinàptica. Vam demostrar per primera vegada que la neuritina soluble va atrofiar la atròfia neurítica i la deterioració de la plasticitat sinàptica que es manifesta en el model de ratolí transgènic TG2576 d’AD, donant suport a un paper per a les funcions autònomes no cel·lulars de la neuritina.

Rols neurotròfics de la neuritina

El terme "neurotròfic" s'utilitza generalment per descriure una col·lecció d'efectes que desencadenen neuritogènesi, arborització de branques, sinaptogènesi o supervivència de neurones diferenciadores. 11 Estudis anteriors que utilitzaven l’expressió transitòria del gen de la neuritina o l’aplicació de pèptid de neuritina van proporcionar evidències que la neuritina exerceix papers neurotròfics almenys durant les etapes de desenvolupament. Aquestes funcions neurotròfiques inclouen la promoció de la neuritogènesi, la regulació 16, 24, 27 de la formació i estabilització de sinapsis, 25, 28, 29, 31 i la prevenció de la mort cel·lular programada. 26, 27 Consistent amb aquestes accions neurotròfiques, el patró d’expressió de la neuritina està correlacionat espatotemporalment amb l’expansió de les cèl·lules progenitores neurals 26, 54 i les modificacions sinàptiques induïdes per l’activitat. 18, 19, 20, 22 Per exemple, la transcripció de neuritines a la còrtex visual es millora durant l’obertura dels ulls, 19, 55 quan també es produeixen increments marcats en la complexitat de ramificació dendrítica i en el nombre d’espina, així com en els miniEPSCs. 33, 56, 57

Vam ampliar els resultats anteriors a l’acció de la neuritina en la formació i la maduració d’espines dendrítiques, demostrant que l’expressió de la neuritina va donar lloc a increments en el nombre i proporcions d’espines de tipus espinós i bolets. A diferència de les versàtils espines petites (filopodia i espines primes) que solen formar sinapsis silencioses o feblement sensibles al glutamat, grans espines (espines tècoles i de bolets) amb grans densitats postsinàptiques estan molt enriquides amb receptors AMPA i són per tant potents sensibles al glutamat presinàptic. alliberament. 2, 58 L’expressió de neuritina va donar lloc a un augment de la freqüència però no de l’amplitud dels miniEPSCs. Combinat amb l’augment de l’abundància d’espines madures funcionalment, l’impacte selectiu en la freqüència de miniEPSCs es pot atribuir a la conversió mediada per neuritina de sinapsis silencioses en sinapsis funcionals, implicant la incorporació de receptors AMPA a pur-N-metil-D-part ( Sinapsis del receptor NMDA). Alternativament, l’expressió postsinàptica de la neuritina pot alterar les característiques presinàptiques, com ara un augment de la probabilitat d’alliberament de vesícules presinàptiques, de manera retrògrada, que redueix en una freqüència més gran de miniEPSCs. 39 Una anàlisi detallada dels mecanismes moleculars subjacents als efectes sinàptics de la neuritina contribuirà a comprendre encara més la maduració funcional de les sinapsis.

Neuritina de longitud completa versus neuritina secretada soluble

Similar a la neuritina endògena, existeix una neuritina expressada de forma exògena tant en formes unides a la superfície cel·lular com en secretades. 26 En les neurones tectals òptiques de X. laevis , l'expressió de la neuritina de longitud completa va promoure el desgast axonal o la ramificació dendrítica, així com la conversió de sinapsis silencioses en sinapsis funcionals, mentre que la forma troncada de neuritina que no tenia la seqüència GPI no. 24, 25 De manera intrigant, la forma secretada de neuritina que inclou el peptid de neuritina va donar lloc a conseqüències neurotròfiques en les neurones de mamífers, inclosa la promoció de l’elaboració neurítica i la prevenció de l’apoptosi. 16, 26, 27 Hi ha la possibilitat que la neuritina que no tingui GPI pugui ser processada de manera inadequada i, per tant, no es pugui secretar a l’espai extracel·lular. 59 Tot i això, s'ha de determinar si i com la neuritina soluble produeix sortides diferents en comparació amb la neuritina unida a la superfície cel·lular.

Sorprenentment, l’efecte sobre la complexitat dendrítica de la neuritina soluble aplicada a les neurones dels ratolins WT era indiscutible de la de les neurones tractades amb PBS (figura 4). Aquesta manca d’efecte per a la neuritina soluble era en fort contrast amb la que s’havia observat anteriorment en les neurones corticals i hipocampals. 16, 26, 27 Aquesta discrepància es pot atribuir a la diferència en l’etapa del desenvolupament neuronal, és a dir, al DIV. Es va examinar la complexitat dendrítica en una fase tardana (DIV, 19) després de l’aplicació de neuritina recombinant soluble, mentre que les anàlisis d’aquests estudis anteriors es van realitzar en etapes anteriors (DIV, 3-7). 16, 26, 27 Aquesta possibilitat és afavorida per la nostra observació que l’elaboració neurítica es va incrementar mitjançant l’expressió de neuritina valorada a 6 DIV (Figura 1). La diferent efectivitat morfològica de la neuritina en un termini de temps limitat es pot deure a un efecte límit per als mecanismes de senyalització activats per neuritina endògena, ja que el nivell de neuritina hipocampal endògena va augmentar des del dia 4 postnatal fins a l'edat adulta. 16 Recapitulant l'augment de neuritina endògena en les neurones hipocampals cultivades pot intensificar les cascades de senyalització aigües avall, que estan completament saturades a 12 DIV; així, l'aplicació exògena de neuritina soluble a partir d'aleshores no produiria efectes addicionals. L’efecte negligible del pèptid de neuritina sobre les neurones WT madureses (figura 4) ens fa pensar que la neuritina té papers en l’arborització dendrítica, la formació de sinapsis i la transmissió sinàptica durant les primeres etapes del desenvolupament, però no quan la seva expressió es satura en la fase posterior (DIV), 19). Tenint en compte una disminució del nivell de neuritina en el cervell dels pacients amb AD 44 i en l’hipocampi dels ratolins Tg2576 (figura 4a), és possible especular que la neuritina exògena pot contrarestar la reducció de la neuritina endògena observada en les neurones dels ratolins Tg2576 a la neurítica inversa atrofia.

La neuritina soluble prevé dèficits sinàptics en l’AD

És important destacar que la neuritina soluble va prevenir l’atrofia dendrítica i la deterioració de la LTP en les neurones de l’hipocamp i l’hipocampi, respectivament, dels ratolins Tg2576. Els dos dèficits impliquen l’activació de la caspasa-3. 46, 60, 61 De fet, es va demostrar que la sinaprotòxica A β activa la caspasa-3, donant lloc a la divisió d’Akt1 (també coneguda com a proteïna cinasa B- α ), l’activitat de la qual és necessàriament crítica per a l’arborització dendrítica i la plasticitat sinàptica. 46, 60, 62, 63 Per tant, és concebible que l’activació d’un receptor putatiu per a la neuritina interfereixi amb l’activació de la caspasa-3 (Putz et al. 26 ) i la posterior divisió d’Akt1, encara que no s’ha pogut valorar aquesta possibilitat.

Recentment, es va informar que la neuritina soluble va desencadenar la via del receptor de la insulina, cosa que suggereix el receptor de la insulina com a receptor putatiu de la neuritina. A més, la kinasa regulada en senyal extracel·lular (ERK) i la diana del mamífer de la rapamicina (mTOR) a través del receptor de la insulina van estimular la neuritina soluble. 42 Les activitats d’ERK i mTOR van estar íntimament involucrades en la síntesi de proteïnes de novo , requisit previ a la plasticitat sinàptica normal i a la formació de memòria. 49, 64, 65 Les evidències emergents indiquen que la desregulació de la senyalització del mTOR contribueix causalment a la patogènesi del TDA, tot i que aquesta continua sent discutible. 64, 66, 67, 68 En els ratolins Tg2576, l'activitat mTOR va ser substancialment suprimida i la subregulació farmacològica del mTOR va rescatar LTP. 66 La importància funcional del mTOR en els defectes sinàptics de la AD es va corroborar per dades de comportament d’un altre model animal de TDA. 68 Per tant, la normalització de LTP en ratolins Tg2576 per infusió de neuritina soluble pot ser deguda a un augment de l’activitat mTOR mediada per la neuritina. Tenint en compte les activitats neuroprotectores de la neuritina soluble, especialment per a les neurones de ratolins Tg2576 en lloc de les de control del WT, serà informatiu determinar si la infusió de neuritina soluble als cervells de ratolins Tg2576 també normalitza els seus dèficits de memòria.

En resum, el tractament amb neuritines va produir activitats neurotròfiques en el desbordament de neurites i en la maduració de la columna dendrítica en les neurones normals, particularment en les primeres etapes del desenvolupament. És important destacar que la neuritina soluble va realitzar accions neuroprotectores per a les neurones i els circuits hipocampals en ratolins Tg2576, que van evitar l’atrofia dendrítica i la deterioració de la plasticitat sinàptica. Vam proporcionar evidències substancials que la neuritina soluble reverteix els defectes sinàptics en un model animal de TDA, cosa que suggereix que manipular el nivell de neuritina endògena o subministrar neuritina soluble exògena pot oferir beneficis terapèutics contra malalties neurodegeneratives.

Materials i mètodes

ADN i construccions virals

Es va utilitzar pIRES-EGFP-neuritin1-FLAG per a la sobreexpressió de neuritina i pIRES-EGFP per al seu plàmid de control sobre neurones hipocampals primàries, que van proporcionar el Dr Nedivi en MIT. 26 Per visualitzar o categoritzar les espines dendrítiques, es va utilitzar pDsRed-Monomer-N1 per a transfecció addicional o virus de la ràbia que codifica GFP millorat (SADΔG eGFP) per a infecció vírica. 43

Cultiu de neurones hipocampals, transfecció i immunocitoquímica

Les neurones hipocampals primàries dissecades a partir del dia 18 embrionari de ratolins C57BL / 6 van ser xapats en folis de recobriment poli-L-lisina (Sigma, St. Louis, MO, EUA). Es van mantenir les neurones en un medi neurobasal (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) complementat amb B27 (Invitrogen), 5 mM L -glutamina (Sigma), 2, 5 μ M de citosina β - D-arabinofuranosida (Sigma), 5% sèrum boví fetal ( Hyclone, Logan, UT, Estats Units) i 1% penicil·lina / estreptomicina (Invitrogen) en un entorn humidificat de 5% de CO 2 /95% O 2 incubadora a 37 ° C.

Les neurones van ser transfectades amb Kit de transfecció de fosfat de calci (Invitrogen) seguint els mètodes descrits anteriorment. 69 Breument, vam incubar neurones en un medi essencial mínim pre-escalfat (Invitrogen) suplementat amb 5 mM MgCl 2 durant 30 min i vam dissoldre el precipitat pre-barrejat d'ADN / fosfat de calci al medi. Després de 45 min d’incubació, les neurones es van rentar tres vegades amb HBSS preequilibrat en una incubadora de 10% de CO 2 /90% O 2 a 37 ° C.

Per a la immunocitoquímica, les neurones es van fixar amb PBS que contenia 4% paraformaldehid, 4% sacarosa durant 10 min a 37 ° C i es va permeabilitzar amb PBS que contenia 0, 2% Tritó X-100, 20 mM glicina durant 5 min a temperatura ambient. Es van rentar les neurones tres vegades amb PBS durant 5 min, es van bloquejar amb 2% d’albúmina sèrica bovina durant 30 min a temperatura ambient i es van incubar amb anticossos primaris contra Flag (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, EUA), MAP2 (Sigma), i Tau-1 (Millipore, Bedford, MA, EUA) a 4 ° C per a la nit. Després del rentat, es van incubar encara més anticossos secundaris conjugats a Alexa Fluor 488 (Invitrogen) o Alexa Fluor 568 (Invitrogen) a 37 ° C durant 45 min.

Adquisició d’imatges i morfometria quantitativa

Les imatges de fluorescència es van obtenir mitjançant un microscopi confocal Olympus Fluoview 1000. Les imatges recopilades a partir de tres o quatre experiments independents sota els mateixos paràmetres es van analitzar mitjançant el programari d'imatges de MetaMorph (Universal Imaging, Bedford Hills, NY, EUA). Per evitar morir les neurones que afectin el resultat, es van excloure de l’anàlisi les neurones amb vacúols al soma i amb la fragmentació dendrítica.

Per a l’anàlisi dendríctica de la columna vertebral, es van triar les neurones poc transfectades per minimitzar l’encavalcament dendrític i es va adquirir una pila d’imatges en la dimensió z amb un gruix de llesca òptica de 0, 4 μ m per cobrir neurones senceres. Els criteris per a la classificació de la columna vertebral es van utilitzar seguint el mètode descrit anteriorment. 38 En resum, les protuberències al llarg de les dendrites es van classificar en quatre classes d’espina en funció de l’amplada del cap i la longitud del coll. Classe I, ‘tossuda’ de curta durada <0, 5 μ m, mancada de capgrossos grans sense coll; Classe II, "bolet" per a espines madures amb una longitud compresa entre 0, 5 i 1, 25 μ m, amb un cap de columna vertebral gran i un coll curt; Classe III, "prima" per a espines amb una longitud entre 1, 25 i 3, 0 μ m, amb un cap de columna petita i un coll allargat; Classe IV, "fillopodia" per a columnes vertebradores amb una protuberància filamentosa llarga i que no tenia cap capçal vertebral distingible.

Per mesurar quantitativament la complexitat de les dendrites, es va utilitzar l’anàlisi de Sholl com es va descriure anteriorment. 36, 41 Després d’eliminar els processos neurítics que aparentment derivaven d’altres cèl·lules de les imatges originals, es van traure cercles concèntrics amb un interval de 10 μm de radi a 15 μm a part del soma i es va comptar amb el nombre d’encreuaments amb branques dendrítiques a cada cercle mitjançant Imatge J (NIH). L’anàlisi del sholl es va realitzar comptant les travessies totals a una distància ~ 120 μ m del soma.

RT-PCR en temps real quantitativa

Total RNA was extracted by miRNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Germany) and 0.5 μ g of RNA was processed for cDNA synthesis using SuperScript III First-Strand Synthesis System for RT-PCR Kit (Invitrogen) according to the manufacturer's instruction. Quantitative real-time RT-PCR was carried out using SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA). Quantitative real-time RT-PCR was performed on a 7500 Fast Real-Time PCR systems (Applied Biosystems). The primers used were as follows: Neuritin forward, 5′-GGGACTTAAGTTGAACGGCA-3′; Neuritin reverse, 5′-ACCCAGCTTGAGCAAACAGT-3′; Gapdh forward, 5′-TCCATGACAACTT TGGCATTG-3′; Gapdh reverse, 5′-CAGTCTTCTGGGT GGCAGTGA-3′. All of the mRNA level were normalized to that of Gapdh mRNA.

Intracerebroventricular infusion of recombinant neuritin peptide using osmotic pumps

To examine the effect of soluble neuritin on synaptic plasticity in the hippocampus of AD model mice, we used Tg2576 mice that expressed human APP695 gene harboring the Swedish double mutation (KM670/671NL). 70 Tg2576 mice (Taconic, Germantown, NY, USA) were crossed with C57BL6/SJL F1 hybrid mice to get the offspring. For LTP experiments, we used 6-month-old heterozygous transgenic mice and their WT littermates. All mice were housed under a 12 h light/dark cycle and given ad libitum access to food and water. All procedures for animal experiments were approved by the ethical review committee of POSTECH (Pohang University of Science and Technology), Korea, and performed in accordance with the relevant guidelines.

Installation of the osmotic pumps was performed following the manufacturer's guideline. Forty eight hours before the surgery, the osmotic mini pump (1007D, Alzet, Cupertino, CA, USA) was filled with aCSF (containing the followings: 10 mM glucose, 119 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH 2 PO 4, 1.3 mM MgSO 4, 2.5 mM CaCl 2, and 26 mM NaHCO 3 at pH 7.4) with or without recombinant neuritin peptide (1260 ng, Abcam, Cambridge, UK) and equilibrated in 0.9% NaCl at 37 o C. Delivery cannula (Alzet, brain infusion kit 3) was implanted in order to target the end of cannula to intracerebroventricle (coordination of anteroposterior, −0.4; mediolateral, ±1; dorsoventral, −2.3 in mM from the bregma) of anesthetized (Ketamine/Xylazine) mice in a stereotaxic apparatus (Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA). The osmotic pump was attached to the delivery cannula tubing and subcutaneously implanted at the back to allow spontaneous infusion (injection speed: 90 ng/day). After 2 weeks of infusion, animals were killed for the LTP experiment.

Electrofisiologia

To measure miniEPSCs, neurons were placed in a recording chamber while perfused with aCSF containing 1 μ M voltage-gated sodium channel blocker tetrodotoxin (Tocris, Minneapolis, MN, USA), 20 μ M NMDA receptor antagonist D -2-amino-5-phosphonovaleric acid (Tocris), 100 μ M γ -aminobutyric acid class A receptor antagonist picrotoxin (PTX, Tocris). Whole-cell voltage-clamp recording was performed with a MultiClamp 700B amplifier (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) using the recording electrodes (3–5 MΩ) filled with a pipette solution containing 100 mM Cs methanesulfonate, 20 mM CsCl, 10 mM HEPES, 10 mM EGTA, 4 mM MgCl 2, 0.4 mM NaGTP, 4 mM MgATP, and 10 mM phosphocreatine (finally adjusted to pH 7.2). Throughout the recording experiments, the series resistance (10–30 MΩ) was monitored while holding neurons at −70 mV. Currents were filtered at 2.4 kHz, digitized at 10 kHz, and then miniEPSCs were analyzed in Mini Analysis Program (Synaptosoft Inc., Fort Lee, NJ, USA) using custom software with detection criteria that included an amplitude>8 pA, a minimum rise rate of 5 pA/ms, and a decay constant between 1–12 ms.

For LTP in acute hippocampal slices, field excitatory postsynaptic potentials (fEPSPs) were recorded from transverse-sectioned acute hippocampal slices (400 μ m thick) obtained from 6-month-old male Tg2576 or their WT littermate mice. After decapitation, hippocampi were quickly isolated from the brain and chilled in ice-cold 50% sucrose-based (175 mM sucrose, 11 mM glucose, 20 mM NaCl, 3.5 mM KCl, 1.4 mM NaH 2 PO 4, 1.3 mM MgCl 2, and 26 mM NaHCO 3, adjusted to pH 7.4) aCSF that was oxygenated with 95% O 2 and 5% CO 2 gas. Acute hippocampal slices were obtained using an 800-McIlwain Tissue Chopper (Brinkman Instruments, Westbury, NY, USA) and placed in oxygenated aCSF at 37 °C for more than 1 h. Slices were maintained in a submerged recording chamber continuously perfused with oxygenated aCSF bath solution, containing 100 μ M PTX, at a flow rate of 2.5–3 ml/min. The fEPSPs were recorded in the striatum radiatum of the CA1 subfield by the 3 M NaCl-filled microelectrodes (3–5 MΩ) while stimulating the Schaffer collateral pathway afferent fibers with a bipolar concentric electrode (WPI). The pulses were generated with an A360 stimulus isolator (WPI) and fEPSPs were recorded with an Axopatch 200A amplifier linked to a Digidata 1200 (Molecular Devices) interface. Test fEPSPs were evoked by the stimulation intensity that yielded one-third of the maximal fEPSP responses at a frequency of 0.033 Hz, and LTP was induced by five episodes of theta burst stimulation (TBS) that were delivered at 0.1 Hz. In each episode, 10 trains of stimulation that consisted of four pulses at 100 Hz were delivered at 5 Hz.

Anàlisi estadística

All the numerical data resulted from analysis were denoted as mean±SEM%. Mann–Whitney U- test or unpaired t -test was used to determine statistical significance between two data set as appropriately. Kolmogorov–Smirnov test was used to compare the spine head diameter and length between groups. In the case of multiple comparisons, one-way ANOVA with post hoc Bonferroni test was used. Statistical significance between groups is expressed as follows: NS, not significant; * P <0, 05; ** P <0, 01; *** P <0, 001.

Informació complementària

Documents de paraula

  1. 1.

    Informació complementària

Fitxers PDF

  1. 1.

    Informació complementària

Glossari

AD

Malaltia d'Alzheimer

A β

β -amyloid

BDNF

factor neurotròfic derivat del cervell

GPI

glycosylphosphatidylinositol

WT

wild type

DIV

days in vitro

MAP2

microtubule-associated protein 2

miniEPSCs

miniature excitatory postsynaptic currents

AMPA

α -amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepro-pionic acid

LTP

long-term potentiation

aCSF

artificial cerebrospinal fluid

NMDA

N-methyl- D -aspartate

ERK

extracellular signal-regulated kinase

mTOR

diana de mamífers de la rapamicina

fEPSPs

field excitatory postsynaptic potentials

TBS

theta burst stimulation

La informació complementària acompanya aquest treball al lloc web de la mort i la malaltia cel·lular (//www.nature.com/cddis)