La sobreexpressió d’una isoforma d’aml1 en la leucèmia aguda i el seu paper potencial en la leucemogènesi | leucèmia

La sobreexpressió d’una isoforma d’aml1 en la leucèmia aguda i el seu paper potencial en la leucemogènesi | leucèmia

Anonim

Resum

AML1 / RUNX1 és un factor de transcripció crítica en la diferenciació i proliferació de cèl·lules hematopoietiques. A partir del gen AML1 , es produeixen almenys tres isoformes, AML1a , AML1b i AML1c mitjançant el splicing alternatiu. AML1a interfereix amb la funció d’AML1b / 1c, que sovint s’anomenen AML1. En aquest estudi, es va trobar un nivell d’expressió més elevat d’ AML1a en pacients de leucèmia limfoblàstica aguda i leucèmia mieloide aguda (AML) -M2 en comparació amb els controls. Addicionalment, AML1a reprimeix la transcripció del promotor del receptor del factor estimulant de la colònia macròfags mediada per AML1b, cosa que indica que AML1a antagonitzà l'efecte de AML1b. Per investigar el paper de l' AML1a en la hematopoiesi i la leucemogènesi in vivo , es van transduir cèl·lules mononuclears de medul·la òssia amb AML1a i després es van trasplantar en ratolins irradiats letalment , que van desenvolupar leucèmia limfoblàstica després del trasplantament. En conjunt, aquests resultats indiquen que la sobreexpressió d’ AML1a pot ser un factor important que contribueix a la leucemogènesi.

Introducció

L’AML1, també conegut com RUNX1, PEBP2αB o CBFα2, és un factor de transcripció que té un paper crucial en la proliferació i la diferenciació de cèl·lules hematopoietiques. AML1 té un domini d’unió a l’ADN, conegut com a domini d’homologia runt (RHD), i un domini de transactivació que s’uneix i regula els gens objectiu, respectivament. 1 AML1 es veu afectada per translocacions cromosòmiques que es troben en la leucèmia humana, incloent t (8; 21), t (3; 21) i t (12; 21). 2, 3, 4 La t (8; 21) és la translocació cromosòmica més freqüent en leucèmia mieloide aguda (AML), i s’uneix AML1 a ETO, donant lloc a la formació de gen de fusió AML1-ETO en què AML1 conserva el RHD, però manca el domini de transactivació. 5, 6 La falta de domini transactivacional se suposa que és el cas que desencadena la leucemogènesi. 6

L’AML1 és essencial per a l’hematopoiesi en el desenvolupament precoç i també en l’edat adulta. Els embrions nuls de l’ AML1 moren típicament al voltant de E12.5 per falta d’hematopoiesi fetal fetal i hemorràgia al sistema nerviós central. 7, 8 La pèrdua de la funció AML1 en l'edat adulta comporta diversos trastorns en l'hematopoiesi, incloent-hi una maduració megacariocítica retardada i una diferenciació limfocítica de T i B. 9 A més, s'ha demostrat que les cèl·lules deficients amb AML1 són susceptibles a transformacions malignes. 10

AML1 regula els promotors o potenciadors de molts gens objectiu, entre ells la interleucina 3, 11 mieloperoxidasa, 12 elastòfases neutrofíliques, 13 factor estimulant de la colònia granulòcits-macròfags (GM-CSF), 14 receptors de factor estimulant la colònia macrofàgica (M-CSFR) 15, 16 i subunitats del receptor antigen de les cèl·lules T (TCRs). 5, 17 RHD és a prop del terminal N i conté aproximadament 128 residus d'aminoàcids. 18, 19 L’ afinitat d’AML1 per a les seves seqüències d’ADN objectiu augmenta significativament a l’heterodimerització amb CBFβ. 20, 21, 22

Fins a l’actualitat s’han identificat almenys tres variants d’ empalmes alternatives del gen AML1 ( AML1a , AML1b i AML1c ). 1 Les proteïnes codificades per AML1b i AML1c tenen un RHD al terminal N i un domini de transactivació al terminal C. En canvi, la proteïna codificada per AML1a té un RHD però manca del domini de transactivació. Com a tal, es creu que la funció de AML1 està mediada per AML1b i AML1c que es consideren que tenen la mateixa funció. 1 Experiments que utilitzen transfecció transitòria han demostrat que AML1b, però no AML1a, TCR transactivat 5, 17 i GM-CSF. 23 AML1a no té cap funció transactivativa per si mateixa, però inhibeix l’activitat transcripcional d’AML1b competint per la seqüència d’ADN de gens objectiu amb una afinitat més alta. La sobreexpressió d’AML1a inhibeix la diferenciació terminal mieloide del llinatge precursor mieloide 32Dcl3 induït per G-CSF. Les evidències recents van demostrar que la AML1a sobreexpressada és més alta en pacients amb LAM que els controls normals. 6 En conseqüència, hipotequem que AML1a , similar a les proteïnes de fusió associades a la leucèmia, pertorba la funció normal de la AML1 i potser pot contribuir a la leucemogènesi.

En aquest estudi, es va examinar primer el nivell d’expressió d’ AML1a en cèl·lules mononuclears de medul·la òssia (BMMNCs) de pacients de leucèmia aguda (AL). Els resultats van indicar que el nivell d’expressió d’ AML1a en leucèmia limfoblàstica aguda (ALL) i subgrup de pacients amb AML (AML-M2) era significativament superior al dels donants sans. Analitzem a més els efectes de AML1a i AML1b sobre la transactivitat amb un plasmid reporter luciferasa que conté el promotor M-CSFR. El resultat va demostrar que AML1a competeix amb AML1b per inhibir la transcripció de M-CSFR. Finalment, es va explorar l’efecte in vivo d’ AML1a mitjançant el trasplantament d’ AML1a que expressava BMMNCs en ratolins irradiats letalment. De 12 ratolins, 9 van desenvolupar leucèmia limfoide entre 16 i 45 setmanes després del trasplantament. Aquests resultats van demostrar: (1) AML1a és un "antagonista" AML1 funcional; (2) La sobreexpressió d’ AML1a pot servir com a esdeveniment oncogènic crític per promoure la leucemogènesi.

Materials i mètodes

Pacients i línies cel·lulars

Un total de 77 pacients amb AL de nou del nostre hospital i 7 donants sans es van estudiar després de donar el seu consentiment informat. El diagnòstic i la classificació de la leucèmia es van fer a partir de la norma de morfologia –immunologia – citogenètica– de la tipologia de biologia molecular mitjançant el sistema francès-americà-britànic. Es van mantenir 24 línies cel·lulars 24, 25 CV-1, NIH 3T3 i 293T en el medi Eagle modificat de Dulbecco complementat amb sèrum boví fetal al 10% (FBS). La línia cel·lular U937 es va mantenir en RPMI 1640 complementada amb un 10% de FBS.

Aïllament de l'ARN i reacció en cadena de la transcriptasa inversa de la polimerasa

Descrit a la informació complementària.

Construcció de plàmids

Descrit a la informació complementària.

Assaig transitiu de la luciferasa

Les cèl·lules CV-1 es van sembrar en plaques de sis pous a una densitat de 5 × 10 5 per pou. La transfecció es va realitzar mitjançant la precipitació mediada per fosfat de calci quan les cèl·lules van assolir el 70% de confluència. Es van utilitzar les combinacions de plasmides següents: 1, 2 μg de plasmidi reporter pM-CSF-R-luc o plàmid reporter pM-CSF-R (mB) -luc amb dosi diferent de pcDNA3-FLAG- AML1a i pCMV5-AML1b i amb 1 μg dels plasmidis β-galactosidae. A les 6 h després de la transfecció, es va canviar el medi. Les cèl·lules es van collir a les 36 h després de la transfecció per a assajos de l'activitat de β-galactosidasa i activitat luciferasa (Promega, Madison, WI, EUA).

Producció viral, transducció i trasplantament de medul·la òssia i trasplantament de cèl·lules tumorals

Descrit a la informació complementària.

Anàlisi de taquilla meridional i reacció en cadena de l'ADN polimerasa genòmica

Es va aïllar ADN genòmic procedent de cèl·lules de mels dels ratolins leucèmics. Es va digerir ADN genòmic (10 μg) amb Bgl II o Xho I, electroforitzat en gel d'agarosa al 1%, transferit a la membrana de Hybond N + (Amersham, Piscataway, NJ, EUA) i es va hibridar amb una 0, 5 kb (kilobasa marcada amb digoxigenina-dUTP). ) Fragment de Nco I corresponent proteïna fluorescent groga (YFP) o Bam HI- No fragment I AML1a corresponent com a sonda. L'anàlisi de Southern Blot es va realitzar amb el marcatge de detecció II d'etiquetatge i detecció d'ADN d'alta qualitat (Roche Diagnostics, Mannheim, Alemanya). La membrana rentada va estar exposada a pel·lícules de raigs X. En el cas de l'ADN genòmic PCR, es van utilitzar 0, 2 μg d'ADN com a plantilla en una reacció de 25 μl, amb primers 5 '-CACTATAGGGAGACCCAAG-3' i 5'-CTATTCTATAGTGTCACCT-3 'per al gen AML1a humà. La reacció PCR es va realitzar durant 30 cicles a 94 ° C durant 45 s, 54 ° C durant 45 s i 72 ° C durant 45 s, seguida de 72 ° C durant 2 min.

Anàlisi de taquilla occidental

Es va realitzar la preparació de lisats de proteïnes i la filtració occidental, tal com s'ha descrit anteriorment. Es van comprar a Sigma 26 anticossos monoclonals anti-FLAG i anticossos anti-β-actina. Es van visualitzar les taques mitjançant quimioluminiscència (ECL; Amersham, Friburg, Alemanya).

Citometria de flux de cèl·lules de ratolí

Per a l'anàlisi del marcador de llinatge, es van incubar cèl·lules (1 × 10 6 ) amb anticossos monoclonals contra Sca-1, c-Kit, Gr-1, Mac-1, Ter119, B220, CD19, Thy1.2, CD3, CD4, CD8 o els seus controls isotípics (Biolegend, San Diego, CA, EUA). Després es van rentar les cèl·lules i es van aplicar per analitzar-les en un citòmetre de flux FACSCalibur (Becton Dickinson, San Jose, CA, EUA).

Anàlisi hematològica i histològica

Les frotis de sang perifèrica (PB) i les diapositives de citosfina de medul·la òssia (BM) es van tacar amb una solució de tinció de Wright – Giemsa. Les mostres de teixit es van fixar amb formalina tamponada amb fosfat al 10% i es van incrustar en parafina. Les seccions es van tacar amb hematoxilina i eosina i es van observar a un microscopi lleuger.

Mètodes estadístics

Per a l'anàlisi estadística, es van produir corbes de supervivència mitjançant les estimacions de Kaplan – Meier, es van comparar les distribucions grupals de forma paramètric mitjançant el test t de l'alumne i es van comparar les distribucions grupals no paramètricament mitjançant el test U de Mann – Whitney o el χ 2- test.

Resultats

Expressió de la isoforma AML1 en AL

Es van analitzar mostres de BM de 77 pacients amb AL de nou , incloent 51 d’AML, 21 de TOT i 5 de leucèmia aguda bifenotípica (BAL) i 7 donants sans per PCCR transcriptasa inversa (RT – PCR) semiquantitativa. L’ expressió AML1a en cèl·lules AL no està associada amb el gènere, l’edat, el recompte inicial de glòbuls blancs i el percentatge mitjà de cèl·lules explosives de BM (taula suplementària 1). El nivell d’expressió d’ AML1a en 21 TOTS els pacients va ser significativament superior al dels controls saludables ( P <0.05; Figura 1a). Tanmateix, l’expressió d’ AML1a en els controls saludables no diferia significativament de la d’AML o BAL (figura 1a). A més, es van analitzar els nivells d’expressió d’ AML1a en diferents subtipus de casos d’AML segons el fenotip FAB. El resultat va demostrar que el nivell d’expressió d’ AML1a va augmentar significativament en pacients M2 sense translocació t (8; 21) en comparació amb el dels controls sans ( P <0.05; Figura 1b). Tot i això, no es va observar cap diferència significativa en el nivell d’expressió d’AML1a entre altres subtipus d’AML i control saludable. Les dades suggereixen que la sobreexpressió d’ AML1a pot tenir un paper important en la leucemogènesi.

Image

Expressió del gen AML1a en leucèmies agudes i donants sans. ( a ) Expressió del gen AML1a en cèl·lules mononuclears de medul·la òssia (BMMNC) de pacients amb leucèmia limfoblàstica aguda (ALL), leucèmia mieloide aguda (AML), leucèmia aguda bifenotípica (BAL) i donants sans. Hi va haver una diferència significativa entre TOTS els pacients i donants sans. ( b ) Expressió del gen AML1a en BMMNC de pacients amb diferents subtipus de LAM i donants sans. Hi va haver una diferència significativa entre pacients amb AML-M2 sense t (8; 21) i donants sans. M2 *, AML-M2 sense t (8; 21) translocació; t (8; 21), AML-M2 amb translació de t (8; 21); '-' mostra valor mitjà; * P <0, 05; NS, poc significatiu.

Imatge a mida completa

Efectes de les transcripcions d’AML1 en la transactivació del gen M-CSFR

Com que AML1 és un factor de transcripció i AML1a està sobreexpressat en TOTS i AML-M2 pacients, a continuació, es van analitzar els efectes d’ AML1a en la transcripció del gen objectiu d’AML1. Les cèl·lules CV-1 es van transfectar amb un plasmidi que expressava AML1a o AML1b. A les 36 h després de la transfecció, es va analitzar l'activitat del gen reporter de la luciferasa mitjançant un luminòmetre. Com es mostra a la figura 2, l’activitat transcripcional del promotor de M-CSFR va ser activada per AML1b (Figura 2a) de forma dependent de la dosi, però no per AML1a (Figura 2b). Es va observar un augment de 3, 8 vegades en l'activitat de luciferasa a les cèl·lules transfectades amb pCMV5- AML1b a una dosi de 0, 2 μg, però no a les cèl·lules transfectades amb pcDNA3 – FLAG– AML1a a la mateixa dosi (figures 2a i b). La diferència entre les dues isoformes era estadísticament significativa ( P <0, 01). Com es mostra a la figura 2c, la transactivació de M-CSFR mediada per AML1b va ser abrogada per cotransfecció amb AML1a de forma dependent de la dosi. Els efectes esmentats van estar completament absents en cèl·lules amb promotor M-CSFR mutant en què es va interrompre la seqüència d’unió AML1 (figura 2d), cosa que indica l’especificitat de les troballes.

Image

Efectes de les transcripcions d’ AML1 en la transactivació del promotor del gen receptor de factor estimulant la colònia macròfags (M-CSFR). ( a ) Transactivitat de l' AML1b sola a diferents dosificacions. ( b ) Transactivitat de l' AML1a sola a diferents dosificacions. ( c ) Abrogació de la transactivitat de AML1b per AML1a de forma dependent de la dosi. ( d ) Efecte de la mutació del lloc d'unió AML1 del promotor M-CSFR sobre la transactivitat. Barres d’error: error estàndard de la mitjana.

Imatge a mida completa

L’AML1a indueix el desenvolupament de leucèmia limfoblàstica

Ja que AML1a podria interferir la regulació de transcripció mediada per la longitud completa de AML1, AML1b. La sobreexpressió d’ AML1a en cèl·lules hematopoietiques pot provocar una deterioració d’hematopoiesi o desenvolupament de leucèmia. Per solucionar aquest problema, es van analitzar els efectes de AML1a in vivo . Les BMMNC infectades amb el virus retroviral de virus de cèl·lules mare murines (MSCV) que expressen una proteïna de fusió FLAG-AML1a i una YFP (figura 3a) van ser inoculades als ratolins C57 BL / 6J femelles irradiades letalment. Els BMMNC infectats amb el vector que expressa YFP només es van utilitzar com a control. El nombre de cèl·lules positives YFP trasplantades en ambdós grups va ser d'aproximadament 30 000 per ratolí. L’expressió de les proteïnes de fusió va ser confirmada per western blot (dades no mostrades). El nombre de cèl·lules positives per YFP en PB, així com l'estat de salut general dels ratolins, van ser estudiats de prop. Dels 12 ratolins del grup AML1a, 9 van desenvolupar leucèmia als 3-11 mesos (figura 3b; taula 1). Els signes de cachexia, com la pèrdua de pes corporal en aquests ratolins van coincidir amb un ràpid augment de cèl·lules positives per YFP des d'un nivell inicial de 2-3% a 10-25% en PB. El temps de supervivència mitjà dels ratolins del grup AML1a va ser de 258 dies. L’autòpsia d’aquests ratolins va revelar esplenomegàlgia i hepatomegàlia (figures 3c i d), de vegades amb el timoma i l’ampliació de ganglis limfàtics. La BM, la melsa, el pulmó, el fetge, el ronyó i el timo es van infiltrar amb cèl·lules de leucèmia (figures 3e – i).

Image

Histopatologia bruta i ratolins AML1a amb fenotip de leucèmia. ( a ) L’estructura dels plasmides retrovirals: pMSCV – IRES – YFP i pMSCV – FLAG – AML1a – IRES – YFP. S'indica la posició dels llocs enzimàtics de restricció així com la sonda utilitzada per a Southern blot. X, Xho I; N, No jo; B, Bam HI. ( b ) Les corbes de supervivència de Kaplan – Meier (leucèmia lliure) de ratolins receptors transduïts amb AML1a ( n = 12) o amb un control vectorial ( n = 12). Es va revelar l’autòpsia d’aquests animals: esplenomegàlia (el panell superior és la melsa de control; c ), hepatomegàlia ( d ; el quadre dret és el fetge de control). Sang perifèrica tacada de Wright – Giemsa (PB) ( e ) i medul·la òssia (BM) ( f ) citospina provinent de ratolins leucèmics representatius AML1a (× 1000) i tinció d’hematoxilina i eosina (H&E) dels òrgans implicats ( g - i ) (× 400). El marc normal va ser destruït i infiltrat per un gran nombre de cèl·lules tumorals en BM ( g ), melsa ( h ) i timus ( i ).

Imatge a mida completa

Taula completa

Una anàlisi de Southern Blot mitjançant la sonda YFP marcada per digoxigenina-dUTP, va demostrar que la major part de la integració del retrovirus AML1a a les cèl·lules leucèmiques va ser monoclonal (figures 3a i 4a). Es va realitzar una anàlisi genètica de PCR i Southern blot mitjançant la sonda AML1a marcada amb digoxigenina-dUTP marcada per comprovar la integració de AML1a en el genoma de les cèl·lules de la melsa leucèmica (figures 3a, 4a i b). RT – PCR es va realitzar per analitzar l’expressió d’ AML1a en cèl·lules de mels de ratolins (Figura 4c). Com a control positiu es va utilitzar les cèl·lules 293T transfectades amb plasmidi pMSCV – FLAG – AML1a – IRES – YFP. Tal com s’indica a la figura 4d, es va detectar clarament la proteïna de fusió FLAG-AML1a en la mostra de mels dels ratolins leucèmics d’AML1a.

Image

Integració i expressió d’ AML1a en cèl·lules de mels de ratolins leucèmics. ( a ) Anàlisi de tacte meridional de la integració provisòria MSCV – FLAG – AML1a – IRES – YFP en ratolins transduïts AML1a. Es va digerir ADN amb Bgl II, que es va tallar una vegada en la seqüència provural, i es van hibridar les taques a una sonda de proteïna fluorescent groga (YFP) (part superior). Es va digerir ADN amb Xho I, que es va tallar dues vegades en la seqüència provisral, i es van hibridar les taques a una sonda AML1a (part inferior). ( b ) ADN genòmic específic per a AML1a en cèl·lules de leucèmia aïllades detectades per PCR genòmica. Com a control positiu, es va amplificar un plasmidi que contenia una plantilla AML1a . SP, melsa. ( c ) L'ARN es va aïllar de la melsa. Les cèl·lules es van transduir només amb AML1a o YFP. Expressió de β-actina (inferior). M, marcador. ( d ) Anàlisi Western blot de la proteïna FLAG ( AML1a ) de la melsa dels ratolins. Les cèl·lules 293T transduïdes amb AML1a van servir de control positiu. Les cel·les d'esplejo del ratolí 21 # transduït amb YFP només es van incloure com a control negatiu. La β-actina es va utilitzar com a control de càrrega.

Imatge a mida completa

La citometria de flux va demostrar que entre el 30-60% dels BMMNC del grup AML1a eren positius en YFP, en comparació amb el 8-15% del grup control. Una altra anàlisi va revelar que hi ha dos fenotips diferents de leucèmia limfoblàstica T en ratolins amb leucèmia (taula 1). Un era Sca-1 +, CD3 + citoplasmàtic (cCD3 + ; Figura 5a), l’altre era CD3 + CD4 + CD8 + (Figura 5b).

Image

Anàlisi fluo-citomètrica de cèl·lules mononuclears de medul·la òssia (BM) i melsa (SP) de ratolins AML1a amb fenotip de leucèmia. ( a ) Augment de les poblacions de cèl·lules Sca-1 + / cCD3 + a les cèl·lules YFP + de BM i melsa d’un fenotip representatiu de ratolí leucèmic AML1a (105 #) representatiu en comparació amb les de les cèl·lules YFP + de BM i SP d’un animal control. . ( b ) Anàlisi de citometria de flux sobre cèl·lules BM i melses recentment aïllades d’un ratolí de leucèmia AML1a (109 #) amb un fenotip de leucèmia limfoblàstica T i un ratolí control. Els complots mostraven expressió d’antígens específics del llinatge (Sca-1, c-Kit, Thy1.2, CD3, CD4, CD8) versus proteïna fluorescent groga (YFP). Els nombres indicaven el percentatge de cel·les del quadrant.

Imatge a mida completa

Per avaluar la transplantabilitat de la leucèmia, es van inocular les cèl·lules de la melsa de cada ratolí leucèmic a quatre ratolins ingents a través de la vena de la cua. Tots els ratolins van desenvolupar ràpidament una leucèmia limfoblàstica, amb una latència mitjana de 47 dies (dades no mostrades).

Discussió

En aquest estudi, vam trobar que AML1a està sobreexpressada en pacients de ALL i AML-M2. Un estudi previ que utilitzava un assaig qualitatiu per a l' AMR1a mRNA 6 va demostrar que es podia detectar AML1a en la meitat dels pacients amb LAM, mentre que gairebé no es va poder detectar expressió de AML1a en subjectes normals. Aquí, es va fer servir un assaig semiquantitatiu per ampliar la investigació en més temes. Sorprenentment, no hem trobat una diferència significativa en l’expressió d’ AML1a entre tots els subtipus pacients d’AML excepte AML-M2 i els donants sans. En canvi, es va trobar una diferència significativa entre TOTS els pacients i el control. Tot i això, en aquest estudi es va limitar el nombre de pacients i els controls saludables, s’hauria de realitzar una investigació més avançada per ampliar el nombre de mostra per obtenir nivells d’expressió més precisos d’AML1a en pacients.

AML1-ETO, com a proteïna negativa dominant, bloqueja la transactivació del promotor GM-CSF mediat per AML1b. 23 AML1-ETO constitueix el primer cop bloquejat la diferenciació de cèl·lules mare hematopoietiques (HSC). La leucèmia mieloide es desenvolupa quan es produeix el segon cop. 26 Inicialment, suposem que, de forma similar a AML1-ETO, AML1a manca d’activitat transcripcional, però s’uneix a l’origen de gens amb afinitat superior a AML1b, 6 i així pot contribuir a la leucemogènesi. Influiria en la diferenciació mieloide i tindria un paper determinant en el desenvolupament de la leucèmia, per la qual cosa triem M-CSFR com a gen objectiu de l’AML1 a estudiar. En els nostres experiments, l'activitat del promotor M-CSFR va ser transactivada en funció de la dosi per AML1b , però no per AML1a . Més important encara, AML1a va interferir amb l’efecte transactivacional d’ AML1b de forma dependent de la dosi. Un estudi anterior també va demostrar que aquest efecte inhibidor per part de l' AML1a podria revertir-se per la sobreexpressió de AML1b que suggereix un mecanisme competitiu.

En els nostres experiments in vivo , el 75% dels ratolins receptors després del trasplantament de BMMNC infectats amb retrovirus amb AML1a van desenvolupar leucèmia. En comparació amb els resultats en pacients, les cèl·lules de leucèmia en aquests ratolins eren només limfoblàstiques, cosa que concorda amb l'evidència que l'AML1 està efectivament implicada en la regulació de l'expressió gènica específica de les cèl·lules T. 27 A més, la investigació de la transcripció d’AML1 suggereix que l’AML1 pot estar implicada de manera crítica en la diferenciació de precursors limfoides en hematopoiesi adulta. A més, la transició de les cèl·lules T del fenotip CD4 - CD8 - (DN) al fenotip CD4 + CD8 + (DP) es veu deteriorada en els ratolins transgènics que porten una forma interferida dominant AML1 (runt). 29 D'acord amb les troballes de Sato et al. , 30 vam trobar que la sobreexpressió d’ AML1a també pot influir en la fase DN o DP de les cèl·lules T. Finalment, s’ha informat que la deficiència d’AML1 predisposa a ratolins a limfoma limfoblàstic T. 10

Les nostres dades suggereixen que la sobreexpressió AML1a pot ser un esdeveniment crític en el desenvolupament de la leucèmia. Tanmateix, pot ser que la sobreexpressió d’ AML1a només sigui suficient per a la leucemogènesi. Primer, no tots els ratolins transduïts amb AML1a van desenvolupar leucèmia. En segon lloc, la leucèmia es va desenvolupar després d’un període relativament llarg, cosa que suggereix que es poden necessitar mutacions o cops addicionals. La integració monoclonal del retrovirus AML1a en cèl·lules leucèmiques també pot donar suport a aquesta hipòtesi. Es van observar dos immunofenotips diferents de leucèmia limfoide en ratolins leucèmics, cosa que indica que algunes mutacions es van produir en diferents estadis de desenvolupament i diferenciació de HSC. Un estudi recent de Tsuzuki et al. va suggerir que AML1a pot millorar la capacitat d’autorenovació de HSC. A partir de les troballes que la sobreexpressió d’ AML1a augmenta el potencial d’ injuració de la tija hematopoietica i les cèl·lules progenitores, es suggereix que es pot aplicar AML1a en el trasplantament de cèl·lules hematopoietiques per ampliar el nombre de cèl·lules. Tot i això, els resultats d’aquest estudi van proporcionar evidències experimentals que es va posar en qüestió la seguretat d’utilitzar AML1a en el trasplantament abans d’una investigació exhaustiva.

En conclusió, el nostre estudi va indicar que l’ AML1a pot tenir un paper crític en la leucemogènesi, especialment en el desenvolupament de la leucèmia limfoide. A més, el model de leucèmia limfoblàstica establert en aquest estudi pot servir com a eina valuosa per a futurs estudis.

Informació complementària

Documents de paraula

  1. 1.

    Informació complementària

  2. 2

    Taula suplementària 1

    La informació complementària acompanya el document del lloc web de Leucèmia (//www.nature.com/leu)