El perfil farmacogenètic de cd133 està associat a la taxa de resposta (rr) i la supervivència lliure de progressió (pfs) en pacients amb càncer colorectal metastàtic (mcrc), tractats amb quimioteràpia basada en bevacizumab | la revista farmacogenòmica

El perfil farmacogenètic de cd133 està associat a la taxa de resposta (rr) i la supervivència lliure de progressió (pfs) en pacients amb càncer colorectal metastàtic (mcrc), tractats amb quimioteràpia basada en bevacizumab | la revista farmacogenòmica

Anonim

Temes

  • Quimioteràpia
  • Càncer de colon
  • Farmacogenogenia
  • Marcadors predictius

Resum

Estudis recents suggereixen CD133, una proteïna superficial àmpliament utilitzada per aïllar cèl·lules mare de càncer de colon, que es va associar amb angiogènesi i recidivància del tumor. Es va plantejar la hipòtesi que els nivells d’expressió gènica i les variacions de línia germinal en CD133 prediuran el resultat clínic en pacients amb càncer colorectal metastàtic (mCRC), tractats en la primera línia amb 5-fluorouracil, oxaliplatí i bevacizumab (BV), i vam investigar si hi ha un correlació amb els nivells d’expressió gènica de CD133, factor de creixement endotelial vascular (VEGF) i els seus receptors. Es van avaluar els nivells d’expressió gènica intra-tumoral mitjançant PCR quantitativa en temps real (RT) a partir de 54 pacients i tres variants de línia germinal del gen CD133 mitjançant polimorfisme de longitud de fragment de restricció PCR de 91 pacients amb ADN genòmic. Els nivells alts d’expressió gènica de CD133 (> 7, 76) van proporcionar una resposta tumoral significativament més gran (RR = 86%) que els pacients amb nivells d’expressió baixos (7, 76, RR = 38%, P ajustada = 0, 003), independentment del VEGF o del seu gen receptor. nivells d’expressió. Els nivells d'expressió gènica de CD133 es van associar significativament amb VEGF i els seus receptors nivells d'ARN messenger (VEGFR-1 ( P <0.01), -2 i -3, P <0.05). Les anàlisis combinades de dos polimorfismes van mostrar una associació significativa amb la supervivència lliure de progressió (PFS) (18, 5 mesos vs 9, 8 mesos, P = 0, 004) en una anàlisi multivariada com a factor pronòstic independent per PFS ( P ajustat = 0, 002). Aquests resultats suggereixen que CD133 és un marcador predictiu per al tractament estàndard de primera línia basat en BV en mCRC.

Introducció

La hipòtesi de cèl·lules mare del càncer proposa que només una subpoblació de cèl·lules canceroses és responsable de l’inici del tumor, la progressió de la malaltia i la quimioresistència. Les cèl·lules mare del càncer (CSC) tenen moltes característiques compartides amb les cèl·lules mare normals, incloent la capacitat d’autorenovar-se, la capacitat de control homeostàtic, sostenint així el creixement del tumor i el potencial de produir progenitors més diferenciats, tot i que una diferenciació aberrant en el cas del CSC . 1, 2 Es va informar per primera vegada de la leucèmia en la identificació prospectiva de CSC. Posteriorment han estat identificats en una àmplia gamma de tumors incloent glioblastoma, càncer de fetge, mama, pròstata i còlon. 3, 4, 5, 6, 7, 8 S’han proposat diversos marcadors de superfície cel·lular per a la identificació d’aquest CSC. Entre aquests, el CD133, una proteïna transmembrana pentaspan, ha estat utilitzat per diversos grups per aïllar CSC en càncer colorectal. 6, 7, 9, 10

CD133 s'ha associat tant in vitro com in vivo amb creixement i progressió del tumor. 6, 7, 9, 10 Estudis in vitro van demostrar la capacitat de les cèl·lules canceroses de còlon CD133 + humanes per iniciar i mantenir tumors, mentre que les cèl·lules CD133 no van créixer en el cultiu cel·lular. En els models de xenograft, les cèl·lules humanes de càncer de còlon CD133 + han demostrat una capacitat clonogènica més elevada i una taxa d’augment per al creixement del tumor en ratolins immunocompromesos que les cèl·lules CD133 6, 7 Treballs recents de Zhu et al. 11 va destacar la importància del CD133 en el càncer colorectal. Van demostrar que l'analogic murí de CD133, Prominin-1, marca les cèl·lules mare intestinals adultes, susceptibles de transformació maligna. Tanmateix, hi ha hagut una controvèrsia important sobre l’expressió de CD133 com a marcador de CSC. Shmelkov et al. 12 van proposar, sobre la base de l'ús d'un model de ratolí transgènic LacZ knock-in que, de fet, CD133 és principalment un marcador de cèl·lules epitelials colonials madures. En els colons humans, van observar que l’expressió del missatge CD133 es superposà amb l’expressió d’una molècula d’adhesió de cèl·lules epitelials. Tot i que això sembla al principi contradictori, de fet, la qüestió no és només si el CD133 és actiu transcripcionalment en les cèl·lules mare del càncer de còlon, sinó que també es poden reconèixer epitops de la proteïna empalmats i glicosilats alternativament; en aquest cas anticossos Prom1 / CD133. Addicionalment, els nivells d'ARN del missatger CD133 no poden originar-se en el CSC de colon o en l'epiteli de càncer de còlon més diferenciat, sinó en cèl·lules endotelials.

Tanmateix, els estudis que investiguen característiques de les cèl·lules CD133 + suggereixen una subpoblació entre aquestes cèl·lules que demostri atributs dels progenitors endotelials, que condueixen a la maduració a les cèl·lules endotelials i demostren així un potencial angiogènic. 13, 14 Bevacizumab (BV), un anticòs humà monoclonal dirigit al factor de creixement endotelial vascular (VEGF), ha demostrat la seva eficàcia en el càncer colorectal i es dóna com a quimioteràpia de primera línia en pacients amb càncer colorrectal metastàtic (mCRC).

El motiu d’aquest estudi era investigar si els nivells d’expressió gènica i les variacions potencialment funcionals de la línia germinal (rs3130, rs2286455 i rs2240688) en CD133 podrien predir el resultat clínic en pacients amb mCRC, tractats en una primera línia amb 5-fluorouracil, oxaliplatina i anti -agent angiogènic BV. Per obtenir més confirmació de la nostra tesi, hem investigat si hi ha una correlació entre els nivells d'expressió gènica de CD133, VEGF i els seus receptors (VEGFR-1, -2 i -3).

Pacients i mètodes

Pacients

Noranta-un pacients amb adenocarcinoma colorectal primari, ja sigui metastàtic o recurrent, van ser elegibles per a aquest estudi (registrat a //www.clinicaltrials.gov, NCT00070122). Els pacients van rebre un tractament de primera línia amb FOLFOX o XELOX i BV entre abril de 2004 i gener de 2009 a la Universitat del sud de Califòrnia / Centre de Càncer Integral de Norris o al Centre Mèdic del Comtat de Los Angeles / Universitat del Sud de Califòrnia. Es van disposar de mostres de tumors primaris de 54 pacients, mentre que de 91 pacients participants hi havia mostres de sang senceres per genotipar. Aquest estudi es va dur a terme a la Universitat del Sud de Califòrnia / Centre de Càncer Integral de Norris i va ser aprovat pel Comitè de Revisió Institucional de la Universitat del Sud de Califòrnia per a Ciències Mèdiques. Tots els pacients van signar un consentiment informat; es van recollir informació de seguiment i dades clíniques a través d’una base de dades iniciada de forma prospectiva i en un intent retrospectiu mitjançant la revisió gràfica.

Avaluació de la resposta del tumor

Les avaluacions basals es van realitzar dins d’una setmana abans de l’administració del fàrmac d’estudi. Els raigs X i els raigs X es van realitzar 4 setmanes abans de començar la teràpia. S'han utilitzat els criteris d'avaluació de la resposta en tumors sòlids. La resposta del tumor es va avaluar cada 6 setmanes. La resposta es va definir de la manera següent: resposta completa, desaparició de totes les lesions diana; resposta parcial, almenys una disminució del 30% en la suma del diàmetre més llarg (LD) de lesions objectiu, prenent com a referència la suma base LD; malaltia estable, ni una contracció suficient per qualificar la resposta parcial ni un augment suficient per qualificar la progressió de la presa de malaltia com a referència la suma més petita de LD des que va començar el tractament; progressió de la malaltia, com a mínim un augment del 20% de la suma de LD de lesions objectiu prenent com a referència la suma més petita de LD registrada des del començament del tractament o l’aparició d’una o més lesions noves. Els clínics també es van registrar la progressió de la malaltia, fins i tot sense fer una valoració radiològica quan els símptomes del pacient es deterioraven.

Microdissecció

Per a l’avaluació dels nivells d’expressió gènica, es van disposar de mostres de teixit incrustat amb parafina fixades en la formalina del tumor primari de 54 pacients. Després d’una revisió representativa de diapositives tenyides d’hematoxilina i eosina per part d’un patòleg, es van obtenir seccions de 10 μm de gruix per a la microdissió captada per làser (PALM Microlaser Technologies AG, Munic, Alemanya) de les regions amb major quantitat de cèl·lules tumorals segons una procediment estàndard.

Aïllament de l’ARN i síntesi complementària de l’ADN

Les seccions van ser després transferides a un tub de reacció que contenia 400 µl de tampó de lisi d'ARN; L'aïllament de l'ARN de mostres incrustades en parafina fixades en la formalina es va realitzar segons un procediment patentat de Response Genetics (Los Angeles, CA, EUA; Patent núm. 6.248.535). Després de l’aïllament de l’ARN, es va realitzar la síntesi complementària de l’ADN com es va descriure anteriorment. 15

Quantificació de PCR en temps real de l’expressió d’ARN missatger

La quantificació dels nivells d'expressió gènica de CD133, VEGF i VEGFR1, -2 i -3 es va realitzar utilitzant β-actina com a gen intern de manteniment i el conjunt de genes per a gens anomenats anteriorment en un mètode de detecció basat en fluorescència en temps real (ABI prisma 7900 Sistema de detecció de seqüències, (TaqMan) Perkin-Elmer Aplicat Biosistema, Foster City, Califòrnia, EUA). La PCR en temps real es va executar com ja va descriure Lord et al ; A la taula 1. Es mostren 15 primers i sondes a la taula 1. La quantificació dels nivells d'expressió gènica es valida amb l'avaluació dels valors del llindar del cicle. Aquests valors de llindar de cicle estan inversament correlacionats amb la quantitat d'ADN complementari en cada mostra i impliquen el nombre de cicles de PCR, fins que el senyal fluorescent superi el llindar i, per tant, es detecta. Els nivells d'ARN de missatgeria relatius (nivells d'expressió gènica) s'expressen com el quocient entre el gen d'interès i el gen intern de manteniment, que s'utilitza com a factor de normalització de la quantitat d'ARN aïllat de l'exemplar. A efectes d’assegurament de la qualitat, les mostres s’han realitzat per triple.

Taula completa

Polimorfismes candidats

Es van escollir polimorfismes candidats amb l’assistència de la pàgina principal d’Ensembl. Es van escollir dos criteris principals per seleccionar les variacions de la línia germinal:

  1. Que el polimorfisme té una certa probabilitat d’alterar la funció del gen de manera biològicament rellevant. Els tres polimorfismes es troben a la regió 3 'no traduïda del gen CD133, on podrien alterar els nivells d'expressió gènica de CD133, és a dir, en influir en els llocs d'unió de microARN.

  2. Que la freqüència del polimorfisme és prou suficient perquè el seu impacte en el resultat clínic seria significatiu a nivell de població. 16

Aïllament de l’ADN genòmic i genotipat

De 91 pacients es va disposar de sang perifèrica. L’ADN genòmic es va extreure dels glòbuls blancs mitjançant el kit QiaAmp (Qiagen, València, CA, EUA). Es van utilitzar primers primers i posteriors per a l'amplificació de PCR. Les mostres es van analitzar mitjançant assajos de polimorfisme de longitud de fragment de restricció PCR. A la taula 1 s'enumeren els imprimadors endavant / invers, els enzims digestius i les temperatures de recuit.

Anàlisi estadística

Els punts finals principals d’aquest estudi van ser la supervivència lliure de progressió (PFS) i la taxa de resposta (RR). La PFS es va calcular des de la data del primer tractament amb FOLFOX / BV o XELOX / BV a les instal·lacions mèdiques de la Universitat del Sud de Califòrnia, fins a la primera observació de la progressió de la malaltia o la mort per qualsevol causa. Si no es va produir cap progressió de la malaltia i el pacient encara estava viu en el moment del darrer seguiment, es va censurar la PFS a la data del darrer seguiment.

L'associació entre el valor de l'expressió gènica CD133 i la resposta del tumor es va avaluar mitjançant el mètode χ 2 màxim. 17, 18 El valor òptim de tall de CD133 es va utilitzar per separar els pacients en dos grups en termes de probabilitat de respondre a la teràpia. El valor P de l'associació es va ajustar amb 2000 simulacions similars a un bootstrap que estimaven la distribució de les estadístiques màximes de χ 2 . El mètode χ 2 màxim s’ha utilitzat en els nostres estudis anteriors per examinar les associacions entre l’expressió gènica i el resultat clínic. 19, 20, 21 Les diferències en el valor d’expressió gènica CD133 per polimorfismes CD133 es van provar mitjançant la prova de dues mostres de Wilcoxon.

Es va provar la distribució al·lèlica dels polimorfismes CD133 per cada raça per a la desviació de l'equilibri de Hardy-Weinberg mitjançant χ 2- test. Es van analitzar les associacions de polimorfismes CD133 individuals amb PFS mitjançant corbes de Kaplan-Meier i test de rang log assumint un model genètic codominant, dominant o recessiu. Les associacions entre polimorfismes genòmics i paràmetres clinicodemogràfics i resposta del tumor es van avaluar mitjançant taules de contingència i la prova exacta de Fisher. L’estimació de la relació de perillositat amb intervals de confiança del 95% es va basar en la prova de classificació de l’anàlisi per a l’anàlisi univariada. 22 L'efecte acumulat dels polimorfismes CD133 sobre el resultat clínic es va examinar combinant els al·lels 132 CD133.

El model de regressió dels riscos proporcionals de Cox es va utilitzar per avaluar l'associació entre polimorfismes CD133 i PFS en ajustar el sexe, el nombre de llocs metastàtics i la raça. El mètode del coeficient de correlació Spearman es va utilitzar per investigar les correlacions entre els nivells d'expressió gènica dels gens del receptor CD133, VEGF i VEGF.

Finalment, es va realitzar una validació creuada de sortida en una, en la qual es va treure un pacient de l'anàlisi i es va valorar l'associació entre CD133 i PFS ajustada per a covariades mitjançant la funció de supervivència condicional dels perills proporcionals de Cox en els pacients restants. El procés es va repetir amb cada pacient deixat fora alhora. Aquest mètode proporciona una aproximació a l'estimació imparcial de la probabilitat de concordança, un índex de discriminació i la precisió predictiva dels models. 21, 23 Al voltant del 95% dels intervals de confiança de bootstrap de la probabilitat de concordança es van calcular mitjançant el mètode correcte de biaix amb mostres de bootstrap de 1999. 24 La probabilitat de concordança oscil·la entre 0, 5 (cap discriminació) i 1, 0 (discriminació perfecta).

El nivell de significació es va establir en P <0, 05 i totes les proves van ser de dues cares. Les anàlisis es van realitzar mitjançant el paquet estadístic SAS versió 9.2 (SAS Institute Cary, NC, EUA) i SAS% MACRO (% cpe desenvolupat per Gönen i Heller).

Resultats

Un total de 91 pacients (54 homes i 37 dones) amb una edat mitjana de 56 anys (rang 28–81) van participar en aquest estudi. Les distribucions racials i ètniques dels participants a l'estudi van ser les següents: 37 blancs, (41%), 21 asiàtics (23%), 28 hispans (31%) i 5 afroamericans (5%). En un seguiment mitjà de 28, 7 mesos (rang 3, 3-53, 8 mesos), la mediana PFS va ser de 12, 4 mesos (95% intervals de confiança: 8, 3-15, 2) en aquests pacients. Es va observar un lloc metastàtic en 51 pacients, mentre que 40 pacients tenien met2 llocs metastàtics. Els tumors de 67 pacients mostraven una diferenciació moderada, 21 pacients tenien una diferenciació deficient i 3 pacients tenien dades sobre la diferenciació. Dels 91 pacients, van morir 31 pacients mentre que no s’ha aconseguit la supervivència mediana global. Les característiques del pacient es descriuen a la taula 2.

Taula completa

Nivells d'expressió gènica de CD133 i resposta del tumor i PFS

Els nivells d’expressió gènica de CD133 van ser quantificables en 54 pacients amb un nivell d’ARN de missatger mitjà per CD133 de 6, 31 (taula 3a). Els nivells d'expressió gènica de CD133 es van associar significativament amb la resposta del tumor (ajustat P = 0, 003, mètode màxim χ 2 ). Es va determinar un valor de tall per a CD133, 7, 76, com el valor òptim per dividir els pacients en subgrups de mal pronòstic i de bon rendiment en termes de resposta al tractament. Els pacients amb nivells alts d’expressió gènica de CD133 (> 7, 76, n = 22) van mostrar una resposta tumoral significativament millor (86%) que els pacients amb nivells d’expressió baixos (7, 76, n = 32, RR = 38%, figura 1a). Tanmateix, no hi va haver cap diferència significativa en la PFS entre els nivells d'expressió CD133 alts i baixos (dades no mostrades).

Taula completa

Image

( a ) Índex de resposta (RR) a FOLFOX / XELOX i bevacizumab (BV). ( b ) Supervivència lliure de progressió (PFS) per a la combinació de polimorfismes de nucleòtids únics rs3130 i rs2086455. Els pacients amb la combinació favorable d’al·lels (homozigot per a C / C tant en polimorfismes com la combinació de C / T a rs2086455 amb C / T o T / T a rs3130) van mostrar un augment significatiu de PFS en comparació amb una disminució de PFS per pacients amb C / C en un polimorfisme i C / T o T / T en l’altre polimorfisme (al·lels desfavorables).

Imatge a mida completa

  • Descarregueu la diapositiva de PowerPoint

Nivells d'expressió gènica de gens de la via CD133 i VEGF

Els nivells d’expressió gènica de VEGF i VEGFR1 van ser quantificables en 53 i 52 pacients, respectivament (taula 3a). Els nivells d'expressió gènica VEGF i VEGFR no es van associar significativament amb PFS o RR (dades no mostrades). Els nivells d'expressió gènica de CD133 es van associar significativament amb VEGF, VEGFR 1, -2 i -3 (Figures 2a-d). Els pacients amb nivells alts d’expressió gènica CD133 intra-tumoral també van mostrar nivells alts d’expressió gènica del receptor VEGF o VEGFR (VEGF, VEGFR-2 i -3 = P <0, 05, VEGFR1 = P <0, 01, taula 3b).

Image

Scatterplots que demostren la relació entre CD133 i el factor de creixement endotelial vascular (VEGF) ( a ), VEGFR1 ( b ), VEGFR2 ( c ) i VEGFR3 ( d ).

Imatge a mida completa

  • Descarregueu la diapositiva de PowerPoint

Taula completa

Variants genètiques en CD133 i PFS

Un total de 91 pacients van ser genotipats amb èxit per rs3130, rs2240688 o rs2286455. Les freqüències al·lèliques observades per a les variants rs2240688 i rs2286455 estaven dins dels límits de probabilitat de l'equilibri de Hardy-Weinberg ( P > 0.05, χ 2- test per a l'equilibri de Hardy-Weinberg) en cada grup de curses. La distribució al·lèlica rs3130 en pacients blancs es va allunyar significativament de l'equilibri de Hardy-Weinberg ( P = 0, 035 χ 2- test). No hi va haver diferències significatives en la distribució de tres variants genètiques de CD133 per raça (taula 4). Cap dels tres polimorfismes CD133 no es va associar significativament amb la resposta del tumor o la PFS. En una anàlisi combinada, vam trobar rs3130 i rs2286455 significatius per a la PFS. Els pacients que portaven C / C en rs2286455 i rs3130 o la combinació de C / T amb C / T o T / T van mostrar un augment significatiu de PFS de 18, 5 mesos, en comparació amb 9, 8 mesos de PFS per a pacients amb CC en un polimorfisme i C / T o T / T a l’altre polimorfisme ( P = 0.004, test de rang de registre, figura 1b). Les freqüències d’al·lel eren del 15, 3% per rs2286455 i del 54, 1% per rs3130 per a cada variant d’al·lel de la població d’estudi blanc. Després de l’ajust per sexe i nombre de llocs metastàtics, l’anàlisi multivariada va mostrar que l’anàlisi combinada de rs2286455 i rs3130 era un factor de pronòstic independent per PFS ( P ajustat = 0, 002). La probabilitat de concordança (0, 675, 95% dels intervals de confiança de bootstrap 0, 653–07, 726) estimada mitjançant la validació creuada d’abandonament va indicar una bona discriminació i precisió predictiva del model multivariant incloent CD133 i covariables (gènere i nombre de llocs metastàtics).

Taula completa

L'associació entre variants genètiques favorables al CD133 i la resposta del tumor no va ser significativa (dades no mostrades).

Combinació d’expressió gènica i variants genètiques

Els valors d’expressió gènica de CD133 i genotips a rs2286455 es van associar significativament entre si ( P = 0.041, el test de dues mostres de Wilcoxon). Els pacients amb C / C van tenir un nivell més baix d’expressió gènica CD133 (mitjana = 4, 43, rang: 0, 03–31, 17) en comparació amb els pacients que portaven C / T (mitjana = 9, 07, rang: 0, 05–35, 09). No hi va haver pacients homozigots per l’al·lel T en els pacients amb mostres d’expressió gènica. A més, els nivells alts d’expressió del gen CD133 intra-tumoral també es van associar significativament amb els al·lels favorables per la combinació de dos polimorfismes CD133 ( P = 0, 044), cosa que implica que els pacients que responen a 5-fluorouracil / BV presenten un augment de PFS.

Discussió

Malgrat la comprensió de la seva funció molecular, l’epítop de la superfície cel·lular definit per prominin1 / CD133 ha obtingut una notorietat important com a marcador que s’associa a cèl·lules mare, CSC i divisió de cèl·lules simètriques. Tanmateix, l’expressió del gen CD133 no està restringida clarament a una població de progenitors o tija, i l’expressió del gen CD133 també s’associa a epiteli més diferenciat. Les nostres dades demostren, per primera vegada, que sabem que els pacients amb mCRC i nivells alts d’expressió gènica CD133 intra-tumorals es beneficien del tractament amb l’inhibidor d’angiogènesi BV. A més, es demostra que els pacients amb alta expressió gènica CD133 també expressen nivells alts de VEGF i els seus receptors. Addicionalment, l’anàlisi combinada de dos polimorfismes del gen CD133 (rs2286455 i rs3130) es va associar amb un benefici favorable en la PFS.

S'ha demostrat que el CD133 tenia un paper en l'angiogènesi patològica i fisiològica postnatal. 25, 26, 27 Diversos estudis han demostrat que el creixement i l’agressivitat del tumor estan directament correlacionats amb el grau de neovascularització. 28 El procés angiogènic està controlat per l’alliberament de factors pro-angiogènics com ara VEGF i interleukina 8.

En un model de ratolí d’úlcera isquèmica diabètica, Barcelos et al. 25 van demostrar que la positivitat de CD133 estava associada a la curació de ferides agilitada. Els autors van associar aquest efecte amb l'estimulació de la proliferació i migració de cèl·lules endotelials. Una anàlisi més detallada va revelar nivells elevats d’expressió gènica de factors angiogènics com VEGF-A i interleukina 8. No és d’estranyar, els efectes pro-angiogènics i pro-migratoris de les cèl·lules CD133 + o el medi condicionat podrien ser debilitats per anticossos anti-angiogènics. Consistent amb aquestes troballes, s’informa d’una correlació d’alts nivells d’expressió gènica CD133 amb nivells d’expressió gènica elevats de VEGF i VEGFR 1, -2 i -3, associats a un paper en la proliferació i migració de cèl·lules endotelials.

Willett et al. 29 demostren que l'efecte d'una sola infusió amb BV disminueix la perfusió tumoral, el volum vascular, la densitat microvascular, la pressió del líquid intersticial i les cèl·lules endotelials i progenitores circulants. Els pacients amb càncer de recte local avançat van rebre un tractament neoadjuvant amb BV de 5 mg kg −1 sols, seguit dues setmanes després per l'administració simultània de BV, 5-fluorouracil i radiació de feix extern a la pelvis abans de la cirurgia. Als 3 dies després del tractament inicial per BV, la quantitat de cèl·lules CD133 + viables en sang perifèrica va disminuir significativament ( P <0.05, test classificat signat per Wilcoxon). En el nostre estudi, els pacients amb alts nivells d’expressió gènica CD133 intra-tumorals van mostrar una taxa de resposta més gran al tractament amb BV, cosa que indica un paper predictiu del CD133 al tractament anti-VEGF.

Segons el nostre coneixement, no hi ha estudis que descriguin una relació amb les variacions de la línia germinal de CD133 en relació amb el resultat clínic. El fet que els polimorfismes que s’associen significativament a un PFS prolongat també estiguin vinculats amb nivells d’expressió gènica de CD133 podria reflectir l’efecte d’una taxa de resposta més gran a la teràpia BV i donar suport encara a una significació funcional per a aquests polimorfismes. Les variacions de la línia germinal poden afectar l'expressió no només en el tumor, sinó també en el teixit envolvent i en el teixit normal, com les cèl·lules endotelials.

Tot i això, aquest estudi té diverses limitacions. Primer, els pacients van ser tractats amb BV i FOLFOX / XELOX sense que un braç de control només rebés FOLFOX / XELOX. En segon lloc, basant-nos en el fet que els nivells d’expressió gènica s’associaven significativament amb polimorfismes en CD133, vam assumir una significació funcional per a aquests polimorfismes. Tanmateix, actualment es desconeix una funció per al producte genètic CD133, no menys important la importància d'aquests polimorfismes, i cal tenir en compte la naturalesa preliminar d'aquest estudi pilot. En tercer lloc, per intentar reduir la probabilitat de sobrevalorar aquest conjunt de dades, vam realitzar una anàlisi de validació interna. En quart lloc, diversos estudis van suggerir una diferència en l’expressió de CD133 en mostres de teixit primari per tumor i metàstasi. Les nostres dades d’expressió gènica es van generar només a partir de mostres de tumor primari i, per tant, poden tenir heterogeneïtat. Tanmateix, som conscients que les nostres conclusions són preliminars i requereixen confirmació en un conjunt de dades independent i més gran.

Cal destacar, però, que són les primeres dades que demostren que els pacients amb nivells alts d’expressió gènica CD133 intra-tumoral es beneficien del tractament amb l’angiogènesi inhibidor BV, indicant a nivell preliminar un paper predictiu per a CD133 en el tractament anti-VEGF, dades que ho justifiquen validació en grans estudis prospectius.